摘 要：本发明涉及一种用于工业大麻中大麻酚类物质检测前处理的组合物，所述组合物包括多壁碳纳米管(MWCNTs)、石墨化碳(GCBs)、C18硅胶填料、中性氧化铝、N?丙基乙二胺固相吸附剂(PSA)或硅酸镁中的一种或多种。本发明提供的组合物对工业大麻中的主要扰物质叶绿素、叶黄素、脂类物质有较好的吸附作用和去除效果，同时对于其他痕量物质如大麻酚类物质等的吸附较小，适合于工业大麻中痕量物质的富集分析。
技术要点
1.一种用于工业大麻中大麻酚类物质检测前处理的组合物，其特征在于，所述组合物包括多壁碳纳米管(MWCNTs)、石墨化碳(GCBs)、C18硅胶填料、中性氧化铝、N-丙基乙二胺固相吸附剂(PSA)或硅酸镁中的一种或多种。
2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述多壁碳纳米管包括氨基多壁碳纳米管和/或羧基多壁碳纳米管。
3.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述大麻酚类物质包括四氢大麻酚酸(THCA)、大麻二酚酸(CBDA)、大麻酚(CBN)、大麻二酚(CBD)或△9-四氢大麻酚(THC)中的一种或多种。
4.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述前处理可以去除包括叶绿素、叶黄素或脂类物质中的一种或多种。
5.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述多壁碳纳米管(MWCNTs)、石墨化碳(GCBs)、C18硅胶填料、中性氧化铝、N-丙基乙二胺固相吸附剂(PSA)和硅酸镁的质量比为1-10:1-10:1-10:10-100:5-50:2-20。
6.如权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述壁碳纳米管(MWCNTs)、石墨化碳(GCBs)、C18硅胶填料、中性氧化铝、N-丙基乙二胺固相吸附剂(PSA)和硅酸镁的质量比为1-5:1-5:1-5:10-50:5-25:2-10。
7.使用权利要求1所述的组合物处理工业大麻的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)称取适量工业大麻样品，研碎，用有机溶剂浸泡；
2)取适量步骤1)的溶液加入离心管中，超声震荡并离心；
3)将步骤2)中离心后的上清液倒入装有所述组合物的离心管中，并震荡；
4)将经过步骤3)处理后的离心管进行离心，取上清液进行检测。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤2)中超声震荡约30min，然后以4000-8000r/min离心约5min。
9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤3)中震荡时间约5min。
10.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤4)中以4000-8000r/min离心约5min。
技术领域
本发明属于分析化学领域，具体涉及一种适用于工业大麻中大麻酚类物质检测前处理的组合物及使用方法。
背景技术
大麻中主要的功效成分为大麻酚类物质，其中四氢大麻酚酸(THCA)、大麻二酚酸(CBDA)、大麻酚(CBN)、大麻二酚(CBD)、△9-四氢大麻酚(THC)这5种含量较多，应用最广泛。据文献报道，大麻二酚(CBD)是目前应用前景最广泛的大麻提取物，是一种淡黄色树脂或结晶，在医学上对癫痫、癌症，多发性硬化症等多种疾病有明显的治疗效果。△9-四氢大麻酚(THC)在吸食或口服后对中枢神经的作用最强，且能与大麻酚(CBN)和大麻二酚(CBD)进行相互转化，因此需要严格控制。由于大麻中含有△9-四氢大麻酚(THC)，曾一度受到世界范围内的严格管制。因此对四氢大麻酚酸(THCA)、大麻二酚酸(CBDA)、大麻酚(CBN)、大麻二酚(CBD)、△9-四氢大麻酚(THC)这五种物质的检测有助于开发评估大麻的基础性研究。
我国工业大麻中大麻酚类物质含量最高仅为3％左右，而有些国家改良的工业大麻中大麻酚类物质含量最高可达15％，因此我们目前现有的技术手段对于检测这种含量较高的工业大麻酚类物质尚有提升的空间。为了促进工业大麻的医学用途以及推动工业大麻的良种繁育，有必要开发准确、灵敏的检测方法，以检测工业大麻中大麻二酚(CBD)、大麻二酚酸(CBDA)、大麻酚(CBN)、△9-四氢大麻酚(THC)、四氢大麻酚酸(THCA)等五种大麻酚类物质。
但是工业大麻中富含叶绿素、叶黄素、脂类物质等干扰基质，具有很强的基质效应，严重影响工业大麻中痕量物质(如大麻酚类物质)的检测。目前，工业大麻中叶绿素、叶黄素、脂类物质的去除方法主要有固相萃取法、固相微萃取法、液液萃取法、加速溶剂萃取法等几种方法。这些传统的萃取方法在一定程度上能够胜任样品前处理的需求，但实际操作中还存在一些不足，例如前处理时叶绿素、叶黄素或脂类物质去除不彻底，导致后续检测结果不精确。此外，还存在操作繁琐、操作费时、样品易污染、净化效率低等问题。
有鉴于此，本发明旨在提供一种适用于工业大麻中大麻酚类物质检测前处理的组合物及使用方法，以解决上述问题中的至少一种。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种用于工业大麻中大麻酚类物质检测前处理的组合物。
具体技术方案
一种用于工业大麻中大麻酚类物质检测前处理的组合物，所述组合物包括多壁碳纳米管(MWCNTs)、石墨化碳(GCBs)、C18硅胶填料、中性氧化铝、N-丙基乙二胺固相吸附剂(PSA)或硅酸镁中的一种或多种。
进一步，所述多壁碳纳米管包括氨基多壁碳纳米管和/或羧基多壁碳纳米管。
PSA是弱阴离子交换净化剂，可强烈的吸附提取液中带有氢键的基质共萃物，保留提取液中的酸性基团，对多酚类物质的去除能力较强，对茶多酚具有较好的去除效果。多壁碳纳米管是一种由单层或多层石墨片层卷曲而成的空心柱状碳纳米材料，多壁碳纳米管有较大的比表面积，因此吸附色素能力非常强。而同时使用氨基多壁碳纳米管和羧基多壁碳纳米管可同时兼顾样品中酸性和碱性杂质的吸附。
进一步，所述大麻酚类物质包括四氢大麻酚酸(THCA)、大麻二酚酸(CBDA)、大麻酚(CBN)、大麻二酚(CBD)或△9-四氢大麻酚(THC)中的一种或多种。经过本发明提供的组合物前处理的工业大麻样品，在后续的检测中，可以检测出上述5种大麻酚类物质中的一种、几种或五种同时检出。
进一步，所述前处理可以去除包括叶绿素、叶黄素或脂类物质中的一种或多种。
进一步，所述多壁碳纳米管(MWCNTs)、石墨化碳(GCBs)、C18硅胶填料、中性氧化铝、N-丙基乙二胺固相吸附剂(PSA)和硅酸镁的质量比为1-10:1-10:1-10:10-100:5-50:2-20。
进一步，所述多壁碳纳米管(MWCNTs)、石墨化碳(GCBs)、C18硅胶填料、中性氧化铝、N-丙基乙二胺固相吸附剂(PSA)和硅酸镁的质量比为1-5:1-5:1-5:10-50:5-25:2-10。
作为一种优选，所述壁碳纳米管(MWCNTs)、石墨化碳(GCBs)、C18硅胶填料、中性氧化铝、N-丙基乙二胺固相吸附剂(PSA)和硅酸镁的质量比为1:1:1:10:5:2。
上述组合物的比例是本发明技术效果的最优选，是实验结果的最优数据。但本发明提供的几种组合物比值的范围依然是本发明要求保护的内容，其技术效果依然可以解决本发明需要解决的技术问题。
本发明的目的之二在于提供一种使用上述组合物处理工业大麻的方法，具体技术方案如下。
使用上述组合物处理工业大麻的方法，包括以下步骤：
1) 称取适量工业大麻样品，研碎，用有机溶剂浸泡；
2) 取步骤1)的溶液超声震荡并离心；
3) 将步骤2)中离心后的上清液倒入装有所述组合物的离心管中，并震荡；
4) 将经过步骤3)处理后的离心管进行离心，取上清液进行检测。
进一步，步骤2)中超声震荡约30min，然后以4000-8000r/min离心约5min。进一步，步骤3)中震荡时间约5min。
进一步，步骤4)中以4000-8000r/min离心约5min。
进一步，所述离心管包括15mL和/或50mL两种规格中的一种或多种。
在本发明其中一个实施例提供的方法中，将1份多壁碳纳米管(MWCNTs)、1份石墨化碳(GCBs)、1份C18硅胶填料、10份中性氧化铝、5份N-丙基乙二胺固相吸附剂(PSA)、2份硅酸镁等几种填料混合均匀，按比例装入15mL或者50mL的离心管中。
有益效果
本发明提供了一种组合物，包括多壁碳纳米管(MWCNTs)、石墨化碳(GCBs)、C18硅胶填料、中性氧化铝、N-丙基乙二胺固相吸附剂(PSA)、硅酸镁等几种填料。对工业大麻中的主要干扰物质叶绿素、叶黄素、脂类物质有较好的吸附作用和去除效果，同时对于其他痕量物质如大麻酚类物质等的吸附较小，适合于工业大麻中痕量物质的富集分析。
本发明还提供了一种使用上述组合物对工业大麻进行前处理的方法，该方法操作简便，效果显著，可以极大提高工业大麻中痕量物质前处理效率，降低工业大麻样品中痕量物质前处理操作的时间和成本。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作一简单地介绍。在所有附图中，类似的元件或部分一般由类似的附图标记标识。附图中，各元件或部分并不一定按照实际的比例绘制。显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
图1是本发明其中一个实施例中装有组合物的净化管的示意图。
图2是经本发明其中一个实施例组合物前处理后的工业大麻HPLC-MS/MS图谱。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
需要说明的是，在本文中，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者装置不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者装置所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括该要素的过程、方法、物品或者装置中还存在另外的相同要素。
如在本说明书中使用的，术语“大约”(例如，用于电离射线辐照剂量率、辐射时间)，典型地表示为所述值的+/-5％，更典型的是所述值的+/-4％，更典型的是所述值的+/-3％，更典型的是所述值的+/-2％，甚至更典型的是所述值的+/-1％，甚至更典型的是所述值的+/-0.5％。
实施例一
制备15mL工业大麻中大麻酚类物质提取基质分散净化管。
该基质分散净化管的结构示意图如图1所示。所述基质分散净化管的制备方法为：取市售15mL离心管，取0.15g多壁碳纳米管(MWCNTs)、0.15g石墨化碳(GCBs)、0.2gC18硅胶填料、1.7g中性氧化铝、0.8gN-丙基乙二胺固相吸附剂(PSA)、0.4g硅酸镁等几种填料混合均匀，装入市售15mL离心管中制的。
实施例二
制备50mL工业大麻中大麻酚类物质提取基质分散净化管。
所述基质分散净化管的制备方法为：取市售50mL离心管，取0.5g多壁碳纳米管(MWCNTs)、0.5g石墨化碳(GCBs)、0.5gC18硅胶填料、5g中性氧化铝、2.5gN-丙基乙二胺固相吸附剂(PSA)、1g硅酸镁等几种填料混合均匀，装入市售50mL离心管中制的。
实施例三
15mL工业大麻中大麻酚类物质检测前处理的方法。
将工业大麻研碎后，过60目筛，取1g样品于离心管中，加入10mL甲醇，超声震荡30min，5000r/min离心5min，取上清液加入装有净化填料的15mL基质分散净化管，震荡5min后，以5000r/min离心5min，取上清液上机检测。样品经净化后对叶绿素、叶黄素、脂肪类物质的去除效果如下表1所示。样品经HPLC-MS/MS检测后，所得回收率如下表2所示。
表1 15ml净化管中工业大麻中叶绿素、叶黄素、脂肪类物质的去除效果
表2 15mL工业大麻HPLC-MS/MS检测结果
实施例四
50mL工业大麻中大麻酚类物质检测前处理的方法
将工业大麻研碎后，过60目筛，取3g样品于离心管中，加入30mL甲醇，超声震荡30min，5000r/min离心5min，取上清液加入装有净化填料的50mL基质分散净化管，震荡5min后，以5000r/min离心5min，取上清液上机检测。
样品经净化后对叶绿素、叶黄素、脂肪类物质的去除效果如下表3所示。样品经HPLC-MS/MS检测后，所得回收率如下表4所示：
表3 50ml净化管中工业大麻中叶绿素、叶黄素、脂肪类物质的去除效果
表4 50mL工业大麻HPLC-MS/MS检测结果
实施例五
50mL工业大麻中大麻酚类物质检测前处理的方法
将工业大麻研碎后，过60目筛，取3g样品于离心管中，加入30mL甲醇，超声震荡30min，5000r/min离心5min，取上清液加入装有净化填料的50mL商品化HLB净化管，震荡5min后，以5000r/min离心5min，取上清液上机检测。样品经净化后对叶绿素、叶黄素、脂肪类物质的去除效果如下表5所示。
表5 50ml商品化HLB净化管中工业大麻中叶绿素、叶黄素、脂肪类物质的去除效果
实验结果：样品经商品化HLB净化管后对叶绿素、叶黄素、脂肪酸的去除效果并不好。
上面结合附图对本发明的实施例进行了描述，但是本发明并不局限于上述的具体实施方式，上述的具体实施方式仅仅是示意性的，而不是限制性的，本领域的普通技术人员在本发明的启示下，在不脱离本发明宗旨和权利要求所保护的范围情况下，还可做出很多形式，这些均属于本发明的保护之内。
摘自国家发明专利，发明人：兰韬，席兴军，初侨，申请号202011208104.3，申请日2020.11 .03
