摘 要：本发明提供一种超低温冷冻干燥汉麻花叶的方法，其特征在于包括：选THC含量低于0.3%的新鲜汉麻的花和/或叶进行剪切、反复进行-100--196℃冷冻2-6h和40-60℃下解冻10-30min、冷冻干燥、亚临界水萃取、浓缩、层析柱进行洗脱、乙醇溶解至过饱和、析出结晶物、洗涤并干燥结晶物，即得取率高、纯度高的大麻二酚CBD产品。提取工艺稳定，最大限度的保留其有效成分，使药效成分充分溶出。
技术要点
1.一种超低温冷冻干燥汉麻花叶的方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）选新鲜汉麻的花和/或叶进行剪切，得碎料；
（2）将步骤（1）的碎料与纯水按1：10-20的质量比混合后，于-100--196℃冷冻2-6h后，于40-60℃下解冻10-30min，再于-100--196℃冷冻2-6h后，再于40-60℃下解冻10-30min，如此反复2-5次，得冷冻物料；
（3）将步骤（2）的冷冻物料放到冷冻干燥机中，进行冷冻干燥，得到干燥物料；
（4）将步骤（3）的干燥物料与水按1:5-10质量比混合，于100-375℃温度、10-15MPa压力下，用亚临界水萃取三次，每次10-30min，每次过滤取滤液，滤渣继续萃取，合并三次滤液，用截留分子量80-120KD的超微过滤膜进行过滤、浓缩，得到大麻二酚浸膏；
（5）将步骤（4）的浸膏用乙醇稀释至固体物含量为2～4％，用层析柱进行洗脱，收集洗脱物，于40-60℃下浓缩，得到大麻二分浓缩液；
（6）在步骤（5）的大麻二酚浓缩液中，加入质量浓度为90％的乙醇溶解至过饱和后，析出结晶物，用纯水洗涤结晶物后，干燥结晶物，即得大麻二酚CBD产品。
2.如权利要求1所述的超低温冷冻干燥汉麻花叶的方法，其特征在于所述汉麻是指四氢大麻酚THC含量低于0.3%的工业大麻。
3.如权利要求1所述的超低温冷冻干燥汉麻花叶的方法，其特征在于所述步骤（2）的-
100--196℃冷冻2-6h所用的冷源是低温液氮。
4.如权利要求1所述的超低温冷冻干燥汉麻花叶的方法，其特征在于所述步骤（3）中，冷冻干燥指：预冻3-8h至样品温度为-40--60℃，升华干燥10-40h至样品温度为5-15℃，解析干燥15-30h至样品温度达25-30℃，然后恒温保存2-4h。
5.如权利要求1所述的超低温冷冻干燥汉麻花叶的方法，其特征在于所述步骤（4）中的亚临界萃取过程中，间歇式搅拌指：搅拌5分钟，停5分钟，再搅拌5分钟，再停5分钟，如此交替循环10-30min，搅拌速度为20-40r/min。
6.如权利要求1所述的超低温冷冻干燥汉麻花叶的方法，其特征在于所述步骤（5）中，层析柱填料为硅胶，粒径为5-100um，流动相为质量浓度为60-80%的乙醇。
技术领域
本发明涉及一种超低温冷冻干燥汉麻花叶的方法，属于生物技术领域。
背景技术
大麻二酚是汉麻的一种提取物，研究表明大麻二酚具有重要的临床应用前景，如对于多种癌症、癫痫、阿尔茨海默病等具有一定的疗效，而且不具有成瘾性。大麻二酚应用前景广阔，但大麻二酚的提取存在着很多问题，比如说传统工艺一般是采取热干燥物料，烘烤程度、粉碎程度都会影响提取率和提取物的纯度，除此，烘烤温度过高会使部分药效成分失效，如果温度不高，烘烤需要的时间就会拉长，整个提取工艺周期也就拉长，这样就造成成本高、耗时长、工艺不稳定较难实现连续化生产。
发明内容
本发明的技术任务是解决现有技术的不足，提供一种超低温冷冻干燥汉麻花叶的方法，主要通过超低温冷冻干燥物料来实现：提取率高、纯度高。
本发明通过下列技术方案实现：一种超低温冷冻干燥汉麻花叶的方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）选新鲜汉麻的花和/或叶进行剪切，得碎料；
（2）将步骤（1）的碎料与纯水按1：10-20的质量比混合后，于-100--196℃冷冻2-6h后，于40-60℃下解冻10-30min，再于-100--196℃冷冻2-6h后，再于40-60℃下解冻10-30min，如此反复2-5次，得冷冻物料；
（3）将步骤（2）的冷冻物料放到冷冻干燥机中，进行冷冻干燥，得到干燥物料；
（4）将步骤（3）的干燥物料与水按1:5-10质量比混合，于100-375℃温度、10-15MPa压力下，用亚临界水萃取三次，每次10-30min，每次过滤取滤液，滤渣继续萃取，合并三次滤液，用截留分子量80-120KD的超微过滤膜进行过滤、浓缩，得到大麻二酚浸膏；
（5）将步骤（4）的浸膏用乙醇稀释至固体物含量为2～4％，用层析柱进行洗脱，收集洗脱物，于40-60℃下浓缩，得到大麻二分浓缩液；
（6）在步骤（5）的大麻二酚浓缩液中，加入质量浓度为90％的乙醇溶解至过饱和后，析出结晶物，用纯水洗涤结晶物后，干燥结晶物，即得大麻二酚CBD产品。
所述汉麻是指四氢大麻酚THC含量低于0.3%的工业大麻。
进一步地，所述步骤（2）的-100--196℃冷冻2-6h所用的冷源是低温液氮，以快速冷冻、解冻再冷冻、解冻的方式，来预处理待冷冻干燥的物料，使物料形态体积变小，便于冷冻干燥，与此同时，破坏细胞壁，使这一干燥物料中的有效成分能够在提取过程中充分溶出，解决大麻二酚提取率低的技术问题。
进一步地，步骤（3）中，所述冷冻干燥指，预冻3-8h至样品温度为-40--60℃，升华干燥10-40h至样品温度为5-15℃，解析干燥15-30h至样品温度达25-30℃，然后恒温保存2-4h，以冷冻干燥物料的方法解决传统工艺使用过高的热干燥温度导致药效成分丧失，过低的热干燥温度导致提取工艺不稳定等技术问题。
进一步地，步骤（4）中，所述亚临界萃取过程中，采取间歇式搅拌，即：搅拌5分钟，停5分钟，再搅拌5分钟，再停5分钟，如此交替循环10-30min，搅拌速度为20-40r/min，以间歇式搅拌结合萃取来解决萃取不充分的技术问题。
进一步地，步骤（5）中，所述层析柱填料为硅胶，粒径为5-100um，流动相为质量浓度为60-80%的乙醇。
本发明通过超低温冷冻干燥的技术来干燥汉麻的花叶，超低温干燥物料的同时，就将细胞壁破坏，得到干燥物料再进行亚临界水萃取，这样就可以得到高提取率、高纯度的大麻二酚产品。
本发明与现有技术相比所产生的有益效果是：
较传统的提取工艺，我们的提取工艺从汉麻花叶干燥阶段过程进行了一系列改进，来尽可能的弥补传统工艺的不足。首先，我们选取的材料为THC含量低于0.3%的汉麻花叶进行提取，然后采用了一种和传统工艺完全不同的干燥技术——超低温冷冻干燥物料，这就弥补了传统工艺热干燥物料带来的一些问题，比如：温度过高使得药效成分丧失；干燥程度的不同导致提取工艺不稳定等问题。通过本发明的一种超低温冷冻干燥汉麻花叶的方法处理后的物料来提取，可以实现提取率高、纯度高。
本发明的一种超低温冷冻干燥汉麻花叶的方法对新鲜的汉麻花叶剪切后直接进行超低温冷冻干燥干燥，避免了传统工艺的热干燥会使部分有效成分丧失的问题，弥补了烘烤过程水分含量不同和粉碎程度不同带来的差异，使提取工艺更加稳定。除此，通过本发明的一种超低温冷冻干燥汉麻花叶的方法处理后的干物料最大限度的保留其有效成分，而且，还使得药效成分充分溶出，达到提取率高、纯度高。
具体实施内容
下面通过实施例对本发明做进一步说明。
实施例1：
一种超低温冷冻干燥汉麻花叶的方法，包含以下步骤：
步骤（1）选四氢大麻酚THC含量低于0.3%的新鲜工业大麻的花和叶进行剪切，得到碎料；
步骤（2）将步骤（1）的碎料与纯水按1∶10的质量比混合后，于-100℃的液氮中冷冻2h，于40℃下解冻10min后，再于-100℃的液氮中冷冻2h，再于40℃下解冻10min，如此反复3次，得到冷冻物料；得到的冷冻物料再冷冻干燥，预冻3h至样品温度到-40℃，升华干燥10h至样品温度为5℃，解析干燥15h，使样品温度到25℃，然后恒温保存2h，得到干燥物料；
步骤（3）将步骤（2）的干燥物料与水按1:5质量比混合，于100℃温度、10MPa压力下，用亚临界水萃取三次，每次采取间歇式搅拌，即：搅拌5分钟，停5分钟，再搅拌5分钟，再停5分钟，如此交替循环10min，搅拌速度为20r/min，每次过滤后取滤液，滤渣继续萃取，合并三次滤液，用截留分子量80-120KD的超微过滤膜进行过滤、浓缩，得到大麻二酚浸膏；
步骤（4）将步骤（3）的浸膏用乙醇稀释至固体物含量为2％，用层析柱进行梯度洗脱，收集洗脱物，于40℃下浓缩，得到大麻二分浓缩液；层析柱填料为硅胶，粒径为5um，流动相为质量浓度为60%的乙醇；
步骤（5）在步骤（4）的大麻二酚浓缩液中，加入质量浓度为90％的乙醇溶解至过饱和后，析出结晶物，用纯水洗涤结晶物后，干燥结晶物，即得大麻二酚CBD产品。
实验例2：
一种超低温冷冻干燥汉麻花叶的方法，包含以下步骤：
步骤（1）选四氢大麻酚THC含量低于0.3%的新鲜工业大麻的花和叶进行剪切，得到碎料；
步骤（2）将步骤（1）的碎料与纯水按1∶20的质量比混合后，于-196℃的液氮中冷冻6h，于60℃下解冻30min后，再于-196℃的液氮中冷冻6h，再于60℃下解冻10min，如此反复5次，得到冷冻物料；得到的冷冻物料再冷冻干燥，预冻8h至样品温度到-60℃，升华干燥40h至样品温度为15℃，解析干燥30h，使样品温度到30℃，然后恒温保存4h，得到干燥物料；
步骤（3）将步骤（2）的干燥物料与水按1:5质量比混合，于375℃温度、15MPa压力下，用亚临界水萃取三次，每次采取间歇式搅拌，即：搅拌5分钟，停5分钟，再搅拌5分钟，再停5分钟，如此交替循环30min，搅拌速度为40r/min，每次过滤后取滤液，滤渣继续萃取，合并三次滤液，用截留分子量80-120KD的超微过滤膜进行过滤、浓缩，得到大麻二酚浸膏；
步骤（4）将步骤（3）的浸膏用乙醇稀释至固体物含量为4％，用层析柱进行梯度洗脱，收集洗脱物，于60℃下浓缩，得到大麻二分浓缩液；层析柱填料为硅胶，粒径为100um，流动相为质量浓度为80%的乙醇；
步骤（5）、在步骤（4）的大麻二酚浓缩液中，加入质量浓度为90％的乙醇溶解至过饱和后，析出结晶物，用纯水洗涤结晶物后，干燥结晶物，即得大麻二酚CBD产品。
实施例3：
一种超低温冷冻干燥汉麻花叶的方法，包含以下步骤：
步骤（1）、选四氢大麻酚THC含量低于0.3%的新鲜工业大麻的花进行剪切，得到碎料；
步骤（2）、将步骤（1）的碎料与纯水按1∶20的质量比混合后，于-196℃的液氮中冷冻6h，于60℃下解冻30min后，再于-196℃的液氮中冷冻6h，再于60℃下解冻10min，如此反复5次，得到冷冻物料；得到的冷冻物料再冷冻干燥，预冻8h至样品温度到-60℃，升华干燥40h至样品温度为15℃，解析干燥30h，使样品温度到30℃，然后恒温保存4h，得到干燥物料；
步骤（3）、将步骤（2）的干燥物料与水按1:5质量比混合，于300℃温度、12MPa压力下，用亚临界水萃取三次，每次采取间歇式搅拌，即：搅拌5分钟，停5分钟，再搅拌5分钟，再停5分钟，如此交替循环20min，搅拌速度为40r/min，每次过滤后取滤液，滤渣继续萃取，合并三次滤液，用截留分子量80-120KD的超微过滤膜进行过滤、浓缩，得到大麻二酚浸膏；
步骤（4）、将步骤（3）的浸膏用乙醇稀释至固体物含量为4％，用层析柱进行梯度洗脱，收集洗脱物，于40℃下浓缩，得到大麻二分浓缩液；层析柱填料为硅胶，粒径为100um，流动相为质量浓度为80%的乙醇；
步骤（5）、在步骤（4）的大麻二酚浓缩液中，加入质量浓度为90％的乙醇溶解至过饱和后，析出结晶物，用纯水洗涤结晶物后，干燥结晶物，即得大麻二酚CBD产品。
实施例4：
一种超低温冷冻干燥汉麻花叶的方法，包含以下步骤：
步骤（1）选四氢大麻酚THC含量低于0.3%的新鲜工业大麻的叶进行剪切，得到碎料；
步骤（2）将步骤（1）的碎料与纯水按1∶10的质量比混合后，于-100℃的液氮中冷冻2h，于40℃下解冻10min后，再于-100℃的液氮中冷冻2h，再于40℃下解冻10min，如此反复3次，得到冷冻物料；得到的冷冻物料再冷冻干燥，预冻3h至样品温度到-40℃，升华干燥10h至样品温度为5℃，解析干燥15h，使样品温度到25℃，然后恒温保存2h，得到干燥物料；
步骤（3）将步骤（2）的干燥物料与水按1:5质量比混合，于300℃温度、12MPa压力下，用亚临界水萃取三次，每次采取间歇式搅拌，即：搅拌5分钟，停5分钟，再搅拌5分钟，再停5分钟，如此交替循环20min，搅拌速度为40r/min，每次过滤后取滤液，滤渣继续萃取，合并三次滤液，用截留分子量80-120KD的超微过滤膜进行过滤、浓缩，得到大麻二酚浸膏；
步骤（4）将步骤（3）的浸膏用乙醇稀释至固体物含量为4％，用层析柱进行梯度洗脱，收集洗脱物，于40℃下浓缩，得到大麻二分浓缩液；层析柱填料为硅胶，粒径为100um，流动相为质量浓度为80%的乙醇；
步骤（5）在步骤（4）的大麻二酚浓缩液中，加入质量浓度为90％的乙醇溶解至过饱和后，析出结晶物，用纯水洗涤结晶物后，干燥结晶物，即得大麻二酚CBD产品。
对照例1：
采用传统的提取工艺，采用热干燥的物料粉碎后与纯水以1:20的比例与纯水混合成悬浮液后于温度100℃，萃取压力10MPa的亚临界状态下萃取30min。萃取液通过截留分子量80-120kD的超微过滤膜进行过滤，得到的滤液浓缩后再进行过柱、收集洗脱物、浓缩洗脱物、结晶。
对照例2：
采用传统的提取工艺，采用热干燥的物料粉碎后与纯水以1:20的比例与纯水混合成悬浮液后于温度375℃，萃取压力15MPa的亚临界状态下萃取30min。萃取液通过截留分子量80-120kD的超微过滤膜进行过滤，得到的滤液浓缩后再进行过柱、收集洗脱物、浓缩洗脱物、结晶。
实施例1-4为本发明提取工艺，对照例两个为传统提取工艺，对比结果如下：
摘自国家发明专利，发明人：李映波，冯红，钟化梅，孙笠雯，罗凡雅，申请号：201910746328.0，申请日期：2019.08.13
