摘 要：本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大麻中提取大麻二酚的方法，特别是涉及一种利用超临界CO2流体萃取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化大麻二酚的新方法。本发明优点：1、应用超临界CO2流体萃取可确保原有的色、味不因受热破坏，更能确保其中热敏性，易氧化物质不被破坏；还可在萃取的过程中同时对萃取物进行分离纯化。2、采用大孔树脂纯化技术，有效成分纯化效果好，有利于工业化大生产。3、超滤是在常温下进行的，因此避免了因热效应引起的有效成分结构变化、损失以及生理活性降低，提高了有效成分的收率。
技术要点
1.一种利用超临界CO2流体萃取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化大麻二酚的新方法，其步骤如下：
(1)将大麻叶或根干燥后粉碎，加入到CO2超临界萃取器中，用乙醇作为夹带剂，萃取压力为20MPa～40MPa，温度为50℃～60℃，萃取时间100min～140min，得萃取物；
(2)将经步骤(1)处理的大麻二酚萃取液用盐酸调其pH值为3.0～4.0，静置、抽滤、减压浓缩得大麻二酚粗提物；
(3)采用一定截留分子量的超滤膜分离，膜操作压力为0.2-0.3MPa，截留率为90-95％；
(4)采用大孔吸附树脂吸附纯化大麻二酚、树脂型号为AB-8、D4006或NKA-II中的一种，在径高比1∶6-1∶8，体积流量2-4BV/h，流速为3-5BV/h下进行吸附；
(5)用体积分数70-80％乙醇，体积流量2-3BV/h条件下进行解析，用薄层色谱法跟踪检测，收集各阶段洗脱液；
(6)回收乙醇，将大麻二酚各阶段洗脱液浓缩，得大麻二酚半成品；
(7)粗粉溶于乙酸乙酯加适量硅胶搅拌，干法上样，上200-300目硅胶柱层析对提取物进行再次纯化，用水洗掉杂质，再用70-90％浓度的乙醇洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测；
(8)回收乙醇，收集洗脱液浓缩，冷冻干燥，得到大麻二酚成品。
2.根据权利要求1所述的一种利用超临界CO2流体萃取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化大麻二酚的新方法，其特征是：在所述的步骤(1)中，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为1％。
3.根据权利要求2所述的一种利用超临界CO2流体萃取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化大麻二酚的新方法，其特征是：在所述的步骤(3)中，超滤膜截留分子量为1000-5000。
4.根据权利要求3所述的一种利用超临界CO2流体萃取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化大麻二酚的新方法，其特征是：在所述的步骤(4)中，大孔树脂吸附时，调整吸附pH值为6-7。
技术领域
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭工业大麻里提取大麻二酚的方法，特别是涉及一种超临界CO2流体萃取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化的新方法。
背景技术
工业大麻是指四氢大麻酚含量低于0.3％的大麻，我国将工业大麻称为汉麻(hemp)，是大麻科(Cannabinaceae)大麻属(Cannabis)1年生草本植物。获准合法种植的工业大麻，均是低含毒量的品种，这些工业大麻(THC＜0.3％)被认为不具备毒品利用价值，但依旧全身是宝，其应用至少包括纺织、造纸、食品、医药、卫生、日化、皮革、汽车、建筑、装饰、包装等领域，是经典的生产资料。
随着美国GWPH(吉瓦制药)公司宣布大麻二酚治疗癫痫三期临床获得成功，大麻二酚的药用价值终于得到提现，Epidiolex是目前GW公司研发的主要利用大麻二酚治疗难治性癫痫候选药物，该口服药物制剂被发展用于治疗一些罕见的儿童期癫痫疾病。大麻酚是大麻叶所含的大麻酚类化合物的一种，是大麻在贮存过程中，其所含的四氢衍生物被空气氧化而产生的。
自2007年以来，GWPH已进行了广泛的大麻治疗癫痫的临床前研究，在各种体外和体内模型中，研究结果表明大麻可显著抗痫和抗惊厥活性；在动物急性癫痫模型中有效减少癫痫发作。迄今为止，GW已经从FDA获得多个针对Epidiolex的孤儿药资格认定，包括Dravet综合征、LGS、结节性硬化症和婴儿痉挛症。此外，GW还获得了FDA的快速通道资格认定，使用Epidiolex治疗Dravet综合征，在本试验中平均年龄16岁，显示了普遍良好耐受性和安全性。
发明内容
本发明优点：
本发明主要采用超临界CO2流体萃取技术，用乙醇做夹带剂，萃取时间短，有效成分活性高；后期采用大孔树脂吸附，纯化效果好。本发明方法简单易操作，适合大生产。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种利用超临界CO2流体萃取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化大麻二酚的新方法，其步骤如下：
(1)将大麻叶或根干燥后粉碎，加入到CO2超临界萃取器中，用乙醇作为夹带剂，萃取压力为20MPa～40MPa，温度为50℃～60℃，萃取时间100min～140min，得萃取物；
(2)将经步骤(1)处理的大麻二酚萃取液用盐酸调其pH值为3.0～4.0，静置、抽滤、减压浓缩得大麻二酚粗提物；
(3)采用一定截留分子量的超滤膜分离，膜操作压力为0.2-0.3MPa，截留率为90-95％；
(4)采用大孔吸附树脂吸附纯化大麻二酚、树脂型号为AB-8、D4006或NKA-II中的一种，在径高比1∶6-1∶8，体积流量2-4BV/h，流速为3-5BV/h下进行吸附；
(5)用体积分数70-80％乙醇，体积流量2-3BV/h条件下进行解析，用薄层色谱法跟踪检测，收集各阶段洗脱液；
(6)回收乙醇，将大麻二酚各阶段洗脱液浓缩，得大麻二酚半成品；
(7)粗粉溶于乙酸乙酯加适量硅胶搅拌，干法上样，上200-300目硅胶柱层析对提取物进行再次纯化，用水洗掉杂质，再用70-90％浓度的乙醇洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测；
(8)回收乙醇，收集洗脱液浓缩，冷冻干燥，得到大麻二酚成品。
本发明应用超临界CO2流体萃取可确保原有的色、味不因受热破坏，更能确保其中热敏性，易氧化物质不被破坏；还可在萃取的过程中同时对萃取物进行分离纯化；本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂，不容于酸、碱及有机媒，对有机物选择性较好，不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附草苁蓉甙，吸附快、解析也快，吸附容量较大。
具体实施方式
实施案例1：
一种利用超临界CO2流体萃取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化大麻二酚的新方法，其步骤如下：
(1)大麻叶或根干燥后粉碎，加入到CO2超临界萃取器中，用乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为1％，萃取压力为20MPa，温度为50℃，萃取时间100min，CO2流量为1mg/g生药·min，得萃取物；
(2)将经步骤(1)处理的大麻二酚萃取液用盐酸调其pH值为3.0，静置、抽滤、减压浓缩得大麻二酚粗提物；
(3)采用超滤膜分离，膜操作压力为0.2MPa，截留分子量1000，截留率为90％；
(4)采用大孔吸附树脂吸附纯化大麻二酚、树脂型号为AB-8，最佳吸附条件为径高比1∶6，体积流量2BV/h，流速为3BV/h，吸附pH值为6；
(5)用70％乙醇体积分数，体积流量2BV/h进行解析，用薄层色谱法跟踪检测，收集各阶段洗脱液；
(6)将大麻二酚各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得大麻二酚半成品；
(7)取大麻二酚半成品溶于乙酸乙酯加适量硅胶搅拌，干法上样，上200-300目硅胶柱层析对提取物进行再次纯化，用水洗掉杂质，再用70％浓度的乙醇洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测；
(8)收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到大麻二酚成品。
实施案例2：
一种利用超临界CO2流体萃取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化大麻二酚的新方法，其步骤如下：
(1)大麻叶或根干燥后粉碎，加入到CO2超临界萃取器中，用乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为1％，萃取压力为30MPa，温度为50℃，萃取时间120min，CO2流量为1mg/g生药·min，得萃取物；
(2)将经步骤(1)处理的大麻二酚萃取液用盐酸调其pH值为4.0，静置、抽滤、减压浓缩得大麻二酚粗提物；
(3)采用超滤膜分离，膜操作压力为0.2MPa，截留分子量3000，截留率为90％；
(4)采用大孔吸附树脂吸附纯化大麻二酚、树脂型号为D4006，最佳吸附条件为径高比1∶8，体积流量2BV/h，流速为3BV/h，吸附pH值为7；
(5)用80％乙醇体积分数，体积流量2BV/h进行解析，用薄层色谱法跟踪检测，收集各阶段洗脱液；
(6)将大麻二酚各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得大麻二酚半成品；
(7)取大麻二酚半成品溶于乙酸乙酯加适量硅胶搅拌，干法上样，上200-300目硅胶柱层析对提取物进行再次纯化，用水洗掉杂质，再用80％浓度的乙醇洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测；
(8)收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到大麻二酚成品。
实施案例3：
一种利用超临界CO2流体萃取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化大麻二酚的新方法，其步骤如下：
(1)大麻叶或根干燥后粉碎，加入到CO2超临界萃取器中，用乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为1％，萃取压力为30MPa，温度为50℃，萃取时间120min，CO2流量为1mg/g生药·min，得萃取物；
(2)将经步骤(1)处理的大麻二酚萃取液用盐酸调其pH值为4.0，静置、抽滤、减压浓缩得大麻二酚粗提物；
(3)采用超滤膜分离，膜操作压力为0.2MPa，截留分子量5000，截留率为95％；
(4)采用大孔吸附树脂吸附纯化大麻二酚、树脂型号为NKA-II，最佳吸附条件为径高比1∶8，体积流量4BV/h，流速为5BV/h，吸附pH值为6；
(5)用75％乙醇体积分数，体积流量3BV/h进行解析，用薄层色谱法跟踪检测，收集各阶段洗脱液；
(6)将大麻二酚各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得大麻二酚半成品；
(7)取大麻二酚粗粉溶于乙酸乙酯加适量硅胶搅拌，干法上样，上200-300目硅胶柱层析对提取物进行再次纯化，用水洗掉杂质，再用90％浓度的乙醇洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测；
(8)收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到大麻二酚成品。
摘自国家发明专利，发明人：姚德坤，万莉，李玉伟，姚德利，申请号201910601843.X，申请日2019.07.01
