摘 要：本发明公开了一种筛选式获得高含量大麻二酚工业大麻植株的方法，1)标准确定，2)工业大麻处理，3)分析，4)培养，本发明不需要提取，通过工业大麻雌株植株的叶柄部位，应用拉曼光谱技术，获得叶柄部位的拉曼光谱，与大麻二酚标样的拉曼光谱的特征谱进行对比，应用比尔定律即可筛选出高大麻二酚含量的植株，在植物幼苗期就可进行筛选，有利于后期的组织培养，与其它育种技术相比,可以大大缩短培育性状优良的品种的周期，对开发利用工业大麻,提供了一种新途径。
技术要点
1.一种筛选式获得高含量大麻二酚工业大麻植株的方法，其特征在于，包括下列步骤：
1)标准确定，取大麻二酚标样，滴在石英载玻片上，将其放置在显微拉曼光谱仪的载物台上，对大麻二酚进行显微拉曼光谱检测，获得大麻二酚标样的拉曼光谱，通过分析研究，确定出大麻二酚拉曼光谱的特征谱；
2)工业大麻处理，在工业大麻育苗期，当育苗中工业大麻达到5～10cm时，取各工业大麻雌株的一段叶柄，对取出的叶柄分别进行处理，处理后放置在显微拉曼光谱仪的载物台，对其进行显微拉曼光谱检测，获得各工业大麻雌株精油的拉曼光谱；
3)分析，将每株叶柄获取的工业大麻雌株精油的拉曼光谱取至少10条光谱线，求平均拉曼光谱，将每株叶柄获取的平均拉曼光谱分别与步骤1)中的大麻二酚拉曼光谱的特征谱进行对比，确定出每株叶柄的平均拉曼光谱的大麻二酚的特征谱，比较各株叶柄的平均拉曼光谱的大麻二酚的特征谱，通过比尔定律筛选出大麻二酚含量最高的叶柄；
4)培养，步骤3)中筛选出的大麻二酚含量高的叶柄的工业大麻植株作为母本进组织培养。
2.如权利要求1所述的一种筛选式获得高含量大麻二酚工业大麻植株的方法，其特征在于：所述步骤3)中将各叶柄获取的平均拉曼光谱与步骤1)中的大麻二酚标样的拉曼光谱的特征谱相比较，通过各叶柄的平均拉曼光谱与步骤1)中的大麻二酚标样的拉曼光谱的特征谱之间峰位比较，确定出各叶柄获取的平均拉曼光谱的大麻二酚的特征谱。
3.如权利要求1所述的一种筛选式获得高含量大麻二酚工业大麻植株的方法，其特征在于：比较所述步骤3)中各株叶柄的平均拉曼光谱的大麻二酚的特征谱的峰高，通过比尔定律筛选出大麻二酚含量最高的叶柄。
4.如权利要求1所述的一种筛选式获得高含量大麻二酚工业大麻植株的方法，其特征在于：所述步骤3)中将叶柄获取的工业大麻雌株精油的拉曼光谱取10～20条光谱线。
5.如权利要求1所述的一种筛选式获得高含量大麻二酚工业大麻植株的方法，其特征在于：所述步骤2)中一段叶柄的长度为0.5～1.5cm。
6.如权利要求1所述的一种筛选式获得高含量大麻二酚工业大麻植株的方法，其特征在于：所述步骤1)的显微拉曼光谱检测中使用的显微拉曼光谱仪中激光功率为2mw，激光波长为785nm；所述步骤2)的显微拉曼光谱仪中激光功率10mw～15mw，激光波长为785nm。
7.如权利要求1所述的一种筛选式获得高含量大麻二酚工业大麻植株的方法，其特征在于，所述步骤2)中对取出的叶柄分别进行处理的方法：用切片机对叶柄进行切片，将切片放置于装有去离子水的培养皿中，用毛笔挑选出透明完整的切片，置于石英载玻片上，切片完全浸入去离子水中。
8.如权利要求1所述的一种筛选式获得高含量大麻二酚工业大麻植株的方法，其特征在于，所述步骤2)中处理后放置在显微拉曼光谱仪的载物台的方法：将具有切片的石英载玻片放置在显微拉曼光谱光谱仪的载物台上，寻找切片上的储油器官，对储油器官中的精油进行拉曼光谱测量，获得各工业大麻雌株储油器官中精油的拉曼光谱，测量过程中，激光功率保持不变。
9.如权利要求1所述的一种筛选式获得高含量大麻二酚工业大麻植株的方法，其特征在于，取其平均拉曼光谱进行分析的方法：利用拉曼光谱仪自带软件，求平均拉曼光谱。
技术领域
本发明涉及工业大麻的筛选培养技术领域，尤其涉及一种筛选式获得高含量大麻二酚工业大麻植株的方法。
背景技术
工业大麻的应用涉及医药、美容、保健、食品、纺织、生物工程材料、造纸、军需及其它轻工业领域，近年来尤其是以工业大麻花叶为原料提取大麻二酚(CBD)发展非常迅猛。大麻二酚具有抗炎、镇痛、抗忧虑、抗痉挛、抗肿瘤等多种功能，在医药、美容、保健等多个领域有广泛的应用前景。工业大麻对环境的适应性较强，是荒坡地开发利用的优选作物，尤其在我国一些地区的产业结构优化、产业精准扶贫等方面体现出独特优势。
为适应CBD开发快速发展的需要，近年来我国，工业大麻(CBD原料)生产规模迅速扩大，但面临培育时间长，培育的质量需要培养成后才能检测，培育的周期长。经文献检索，未见与本发明技术方案相同的公开报道。
发明内容
本发明的提供一种筛选式获得高含量大麻二酚工业大麻植株的方法。
本发明的方案是：
一种筛选式获得高含量大麻二酚工业大麻植株的方法，包括下列步骤：
1)标准确定，取大麻二酚标样，滴在石英载玻片上，将其放置在显微拉曼光谱仪的载物台上，对大麻二酚进行显微拉曼光谱检测，获得大麻二酚标样的拉曼光谱，通过分析研究，确定出大麻二酚拉曼光谱的特征谱；
2)工业大麻处理，在工业大麻育苗期，当育苗中工业大麻达到5～10cm时，取各工业大麻雌株的一段叶柄，对取出的叶柄分别进行处理，处理后放置在显微拉曼光谱仪的载物台，对其进行显微拉曼光谱检测，获得各工业大麻雌株精油的拉曼光谱；
3)分析，将每株叶柄获取的工业大麻雌株精油的拉曼光谱取至少10条光谱线，求平均拉曼光谱，将每株叶柄获取的平均拉曼光谱分别与步骤1)中的大麻二酚拉曼光谱的特征谱进行对比，确定出每株叶柄的平均拉曼光谱的大麻二酚的特征谱，比较各株叶柄的平均拉曼光谱的大麻二酚的特征谱，通过比尔定律筛选出大麻二酚含量最高的叶柄；
4)培养，步骤3)中筛选出的大麻二酚含量高的叶柄的工业大麻植株作为母本进组织培养。作为优选的技术方案，所述步骤3)中将各叶柄获取的平均拉曼光谱与步骤1)中的大麻二酚标样的拉曼光谱的特征谱相比较，通过各叶柄的平均拉曼光谱与步骤1)中的大麻二酚标样的拉曼光谱的特征谱之间峰位比较，确定出各叶柄获取的平均拉曼光谱的大麻二酚的特征谱。作为优选的技术方案，比较所述步骤3)中各株叶柄的平均拉曼光谱的大麻二酚的特征谱的峰高，通过比尔定律筛选出大麻二酚含量最高的叶柄。
作为优选的技术方案，所述步骤3)中将叶柄获取的工业大麻雌株精油的拉曼光谱取10～20条光谱线。
作为优选的技术方案，所述步骤2)中一段叶柄的长度为0.5～1.5cm。
作为优选的技术方案，所述步骤1)的显微拉曼光谱检测中使用的显微拉曼光谱仪中激光功率为2mw，激光波长为785nm；所述步骤2)的显微拉曼光谱仪中激光功率10mw～15mw，激光波长为785nm。
作为优选的技术方案，所述步骤2)中对取出的叶柄分别进行处理的方法：用切片机对叶柄进行切片，将切片放置于装有去离子水的培养皿中，用毛笔挑选出透明完整的切片，置于石英载玻片上，切片完全浸入去离子水中。
作为优选的技术方案，所述步骤2)中处理后放置在显微拉曼光谱仪的载物台的方法：将具有切片的石英载玻片放置在显微拉曼光谱光谱仪的载物台上，寻找切片上的储油器官，对储油器官中的精油进行拉曼光谱测量，获得各工业大麻雌株储油器官中精油的拉曼光谱，测量过程中，激光功率保持不变。作为优选的技术方案，取其平均拉曼光谱进行分析的方法：利用拉曼光谱仪自带软件，求平均拉曼光谱。
由于采用了上述技术方案，一种筛选式获得高含量大麻二酚工业大麻植株的方法，1)标准确定，取大麻二酚标样，滴在石英载玻片上，将其放置在显微拉曼光谱仪的载物台上，对大麻二酚进行显微拉曼光谱检测，获得大麻二酚标样的拉曼光谱，通过分析研究，确定出大麻二酚拉曼光谱的特征谱；2)工业大麻处理，在工业大麻育苗期，当育苗中工业大麻达到5～10cm时，取各工业大麻雌株的一段叶柄，对取出的叶柄分别进行处理，处理后放置在显微拉曼光谱仪的载物台，对其进行显微拉曼光谱检测，获得各工业大麻雌株精油的拉曼光谱；3)分析，将每株叶柄获取的工业大麻雌株精油的拉曼光谱取至少10条光谱线，求平均拉曼光谱，将每株叶柄获取的平均拉曼光谱分别与步骤1)中的大麻二酚拉曼光谱的特征谱进行对比，确定出每株叶柄的平均拉曼光谱的大麻二酚的特征谱，比较各株叶柄的平均拉曼光谱的大麻二酚的特征谱，通过比尔定律筛选出大麻二酚含量最高的叶柄；4)培养，步骤3)中筛选出的大麻二酚含量高的叶柄的工业大麻植株作为母本进组织培养。
本发明的优点
1、不需要提取，通过工业大麻雌株植株的叶柄部位，应用拉曼光谱技术，获得叶柄部位的拉曼光谱的特征谱，与大麻二酚标样的拉曼光谱的特征谱进行对比，应用比尔定律即可筛选出高大麻二酚含量的植株。
2、在植物幼苗期就可进行筛选，有利于后期的组织培养。
3、与其它育种技术相比,可以大大缩短培育性状优良的品种的周期.对开发利用工业大麻,提供了一种新途径。
具体实施方式
为了弥补以上不足，本发明提供了一种筛选式获得高含量大麻二酚工业大麻植株的方法以解决上述背景技术中的问题。一种筛选式获得高含量大麻二酚工业大麻植株的方法，包括下列步骤：
1)标准确定，取大麻二酚标样，滴在石英载玻片上，将其放置在显微拉曼光谱仪的载物台上，对大麻二酚进行显微拉曼光谱检测，获得大麻二酚标样的拉曼光谱，通过分析研究，确定出大麻二酚拉曼光谱的特征谱；
2)工业大麻处理，在工业大麻育苗期，当育苗中工业大麻达到5～10cm时，取各工业大麻雌株的一段叶柄，对取出的叶柄分别进行处理，处理后放置在显微拉曼光谱仪的载物台，对其进行显微拉曼光谱检测，获得各工业大麻雌株精油的拉曼光谱；
3)分析，将每株叶柄获取的工业大麻雌株精油的拉曼光谱取至少10条光谱线，求平均拉曼光谱，将每株叶柄获取的平均拉曼光谱分别与步骤1)中的大麻二酚拉曼光谱的特征谱进行对比，确定出每株叶柄的平均拉曼光谱的大麻二酚的特征谱，比较各株叶柄的平均拉曼光谱的大麻二酚的特征谱，通过比尔定律筛选出大麻二酚含量最高的叶柄；
4)培养，步骤3)中筛选出的大麻二酚含量高的叶柄的工业大麻植株作为母本进组织培养。
所述步骤3)中将各叶柄获取的平均拉曼光谱与步骤1)中的大麻二酚标样的拉曼光谱的特征谱相比较，通过各叶柄的平均拉曼光谱与步骤1)中的大麻二酚标样的拉曼光谱的特征谱之间峰位比较，确定出各叶柄获取的平均拉曼光谱的大麻二酚的特征谱。比较所述步骤3)中各株叶柄的平均拉曼光谱的大麻二酚的特征谱的峰高，通过比尔定律筛选出大麻二酚含量最高的叶柄。所述步骤3)中将叶柄获取的工业大麻雌株精油的拉曼光谱取10～20条光谱线。
所述步骤2)中一段叶柄的长度为0.5～1.5cm。
所述步骤1)的显微拉曼光谱检测中使用的拉曼显微拉曼光谱仪中激光功率为2mw，激光波长为785nm；所述步骤2)的显微拉曼光谱仪中激光功率为10～15mw，激光波长为785nm。所述步骤2)中对取出的叶柄分别进行处理的方法：用切片机对叶柄进行切片，将切片放置于装有去离子水的培养皿中，用毛笔挑选出透明完整的切片，置于石英载玻片上，切片完全浸入去离子水中。
所述步骤2)中处理后放置在显微拉曼光谱仪的载物台的方法：将具有切片的石英载玻片放置在显微拉曼光谱仪的载物台上，寻找切片上的储油器官，对储油器官中的精油进行拉曼光谱测量，获得各工业大麻雌株储油器官中精油的拉曼光谱，测量过程中，激光功率保持不变。
取其平均拉曼光谱进行分析的方法：利用拉曼光谱仪自带软件，求平均拉曼光谱。
为了使本发明实现的技术手段、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。
实施例1：
1)标准确定，取大麻二酚标样，滴在石英载玻片上，将其放置在显微拉曼光谱仪的载物台上，对大麻二酚进行显微拉曼光谱检测，获得大麻二酚标样的拉曼光谱，通过分析研究，确定出大麻二酚拉曼光谱的特征谱；
2)工业大麻处理，在工业大麻育苗期，当育苗中工业大麻达到5cm时，取各工业大麻雌株的一段叶柄，对取出的叶柄分别进行处理，处理后放置在显微拉曼光谱仪的载物台，对其进行显微拉曼光谱检测，获得各工业大麻雌株精油的拉曼光谱；
3)分析，将每株叶柄获取的工业大麻雌株精油的拉曼光谱取10条光谱线，求平均拉曼光谱，将每株叶柄获取的平均拉曼光谱分别与步骤1)中的大麻二酚拉曼光谱的特征谱进行对比，确定出每株叶柄的平均拉曼光谱的大麻二酚的特征谱，比较各株叶柄的平均拉曼光谱的大麻二酚的特征谱，通过比尔定律筛选出大麻二酚含量最高的叶柄；
4)培养，步骤3)中筛选出的大麻二酚含量高的叶柄的工业大麻植株作为母本进组织培养。
所述步骤3)中将各叶柄获取的平均拉曼光谱与步骤1)中的大麻二酚标样的拉曼光谱的特征谱相比较，通过各叶柄的平均拉曼光谱与步骤1)中的大麻二酚标样的拉曼光谱的特征谱之间峰位比较，确定出各叶柄获取的平均拉曼光谱的大麻二酚的特征谱。比较所述步骤3)中各株叶柄的平均拉曼光谱的大麻二酚的特征谱的峰高，通过比尔定律筛选出大麻二酚含量最高的叶柄。所述步骤2)中一段叶柄的长度为0.5cm。
所述步骤1)的显微拉曼光谱检测中使用的拉曼显微拉曼光谱仪中激光功率为2mw，激光波长为785nm,所述步骤2)的显微拉曼光谱仪中激光功率为10mw，激光波长为785nm。所述步骤2)中对取出的叶柄分别进行处理的方法：用切片机对叶柄进行切片，将切片放置于装有去离子水的培养皿中，用毛笔挑选出透明完整的切片，置于石英载玻片上，切片完全浸入去离子水中。
所述步骤2)中处理后放置在显微拉曼光谱仪的载物台的方法：将具有切片的石英载玻片放置在显微拉曼光谱光谱仪的载物台上，寻找切片上的储油器官，对储油器官中的精油进行拉曼光谱测量，获得各工业大麻雌株储油器官中精油的拉曼光谱，测量过程中，激光功率保持不变。
取其平均拉曼光谱进行分析的方法：利用拉曼光谱仪自带软件，求平均拉曼光谱。
实施例2：
一种筛选式获得高含量大麻二酚工业大麻植株的方法，包括下列步骤：
1)标准确定，取大麻二酚标样，滴在石英载玻片上，将其放置在显微拉曼光谱仪的载物台上，对大麻二酚进行显微拉曼光谱检测，获得大麻二酚标样的拉曼光谱，通过分析研究，确定出大麻二酚拉曼光谱的特征谱；
2)工业大麻处理，在工业大麻育苗期，当育苗中工业大麻达到10cm时，取各工业大麻雌株的一段叶柄，对取出的叶柄分别进行处理，处理后放置在显微拉曼光谱仪的载物台，对其进行显微拉曼光谱检测，获得各工业大麻雌株精油的拉曼光谱；
3)分析，将每株叶柄获取的工业大麻雌株精油的拉曼光谱取20条光谱线，求平均拉曼光谱，将每株叶柄获取的平均拉曼光谱分别与步骤1)中的大麻二酚拉曼光谱的特征谱进行对比，确定出每株叶柄的平均拉曼光谱的大麻二酚的特征谱，比较各株叶柄的平均拉曼光谱的大麻二酚的特征谱，通过比尔定律筛选出大麻二酚含量最高的叶柄；
4)培养，步骤3)中筛选出的大麻二酚含量高的叶柄的工业大麻植株作为母本进组织培养。
所述步骤3)中将各叶柄获取的平均拉曼光谱与步骤1)中的大麻二酚标样的拉曼光谱的特征谱相比较，通过各叶柄的平均拉曼光谱与步骤1)中的大麻二酚标样的拉曼光谱的特征谱之间峰位比较，确定出各叶柄获取的平均拉曼光谱的大麻二酚的特征谱。
比较所述步骤3)中各株叶柄的平均拉曼光谱的大麻二酚的特征谱的峰高，通过比尔定律筛选出大麻二酚含量最高的叶柄。
所述步骤2)中一段叶柄的长度为1.5cm。
所述步骤1)的显微拉曼光谱检测中使用的拉曼显微拉曼光谱仪中激光功率为2mw，激光波长为785nm，所述步骤2)的显微拉曼光谱仪中激光功率15mw，激光波长为785nm。
所述步骤2)中对取出的叶柄分别进行处理的方法：用切片机对叶柄进行切片，将切片放置于装有去离子水的培养皿中，用毛笔挑选出透明完整的切片，置于石英载玻片上，切片完全浸入去离子水中。
所述步骤2)中处理后放置在显微拉曼光谱仪的载物台的方法：将具有切片的石英载玻片放置在显微拉曼光谱光谱仪的载物台上，寻找切片上的储油器官，对储油器官中的精油进行拉曼光谱测量，获得各工业大麻雌株储油器官中精油的拉曼光谱，测量过程中，激光功率保持不变。
取其平均拉曼光谱进行分析的方法：利用拉曼光谱仪自带软件，求平均拉曼光谱。
实施例3：
一种筛选式获得高含量大麻二酚工业大麻植株的方法，包括下列步骤：
1)标准确定，取大麻二酚标样，滴在石英载玻片上，将其放置在显微拉曼光谱仪的载物台上，对大麻二酚进行显微拉曼光谱检测，获得大麻二酚标样的拉曼光谱，通过分析研究，确定出大麻二酚拉曼光谱的特征谱；
2)工业大麻处理，在工业大麻育苗期，当育苗中工业大麻达到7cm时，取各工业大麻雌株的一段叶柄，对取出的叶柄分别进行处理，处理后放置在显微拉曼光谱仪的载物台，对其进行显微拉曼光谱检测，获得各工业大麻雌株精油的拉曼光谱；
3)分析，将每株叶柄获取的工业大麻雌株精油的拉曼光谱取15条光谱线，求平均拉曼光谱，将每株叶柄获取的平均拉曼光谱分别与步骤1)中的大麻二酚拉曼光谱的特征谱进行对比，确定出每株叶柄的平均拉曼光谱的大麻二酚的特征谱，比较各株叶柄的平均拉曼光谱的大麻二酚的特征谱，通过比尔定律筛选出大麻二酚含量最高的叶柄；
4)培养，步骤3)中筛选出的大麻二酚含量高的叶柄的工业大麻植株作为母本进组织培养。所述步骤3)中将各叶柄获取的平均拉曼光谱与步骤1)中的大麻二酚标样的拉曼光谱的特征谱相比较，通过各叶柄的平均拉曼光谱与步骤1)中的大麻二酚标样的拉曼光谱的特征谱之间峰位比较，确定出各叶柄获取的平均拉曼光谱的大麻二酚的特征谱。
比较所述步骤3)中各株叶柄的平均拉曼光谱的大麻二酚的特征谱的峰高，通过比尔定律筛选出大麻二酚含量最高的叶柄。
所述步骤2)中一段叶柄的长度为1.2cm。
所述步骤1)的显微拉曼光谱检测中使用的拉曼显微拉曼光谱仪中激光发光光源激光功率为2mw，激光波长为785nm；所述步骤2)的显微拉曼光谱仪中激光发光光源激光功率10mw，激光波长为785nm。
所述步骤2)中对取出的叶柄分别进行处理的方法：用切片机对叶柄进行切片，将切片放置于装有去离子水的培养皿中，用毛笔挑选出透明完整的切片，置于石英载玻片上，切片完全浸入去离子水中。
所述步骤2)中处理后放置在显微拉曼光谱仪的载物台的方法：将具有切片的石英载玻片放置在显微拉曼光谱光谱仪的载物台上，寻找切片上的储油器官，对储油器官中的精油进行拉曼光谱测量，获得各工业大麻雌株储油器官中精油的拉曼光谱，测量过程中，激光功率保持不变。
取其平均拉曼光谱进行分析的方法：利用拉曼光谱仪自带软件，求平均拉曼光谱。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界。
摘自国家发明专利，发明人：司民真，罗煜，徐成东，李国树，申请号201911048495.4，申请日2019.10.31
