[麻专利]一种高效液相色谱检测工业大麻花叶及其提取物中大麻素的方法

作者：尹升权等来源：发布时间：2021-11-09 Tag: 点击：

摘要：本发明公开了一种高效液相色谱检测工业大麻花叶及其提取物中大麻素的方法，其特征在于：包括以下步骤：①花叶提取叶的制备：将花叶粉末用第一提取溶剂进行超声提取、离心分离、过滤得到花叶提取液；②提取物样品的制备：将花叶提取液利用第二提取溶剂进行超声提取、过滤得到提取物检测样品；③标准工作溶液的制备：将大麻素标准品用甲醇稀释成标准工作溶液；④高效液相色谱测定：利用高效液相色谱对提取物检测样品和标准工作液进行进样检测，得到标准曲线，之后采用高效液相色谱数据处理软件，按照标准曲线计算出提取物检测样品的大麻素成分含量。本发明具有出峰时间快，检测时间短，检验的效率高、检测结果准确、稳定优点，适合工业化检测。

技术要点

1.一种高效液相色谱检测工业大麻花叶及其提取物中大麻素的方法，其特征在于，包括以下步骤：

①花叶提取叶的制备：先将大麻花叶置于烘箱中进行烘烤，之后将烘烤后的大麻花叶送入粉碎机内粉碎成花叶粉末，然后精确称取花叶粉末置于带磨口的三角烧瓶中，并向烧杯加入第一提取溶剂，第一提取溶剂与花叶粉末的质量比为1：90～100，然后将三角烧瓶密闭、静置后再超声提取，超声提取的过程中向三角烧瓶中加入第一提取溶剂进行补重，提取结束后将提取液放入离心机内进行离心分离，离心分离后精确量取上清液于容量瓶中，并用第一提取溶剂定容至刻度线，最后将定容后的上清液经过有机微孔滤膜进行过滤，过滤得到滤液即花叶提取液；

②提取物样品的制备：将步骤①制得的花叶提取液精确称取后置于带磨口的三角烧瓶中，并准确向三角烧瓶中加入第二提取溶剂，第二提取溶剂与花叶提取液的质量比为0.5：450～500，然后将三角烧瓶密闭、静置后进行超声溶解得到溶解液，超声溶解的过程中向三角烧瓶中加入第二提取溶剂进行补重，之后将补重后的溶解液经过有机微孔滤膜进行过滤，过滤得到的滤液即为提取物检测样品；

③标准工作溶液的制备：将购买得到的大麻素标准品用甲醇稀释成浓度为5～80ug/mL的标准工作溶液；

④高效液相色谱测定：利用高效液相色谱的检验操作标准对步骤②制得的提取物检测样品和步骤③制得的标准工作液进行进样检测，操作方法如下：

a定性分析：先将提取物检测样品和标准工作溶液在高效液相色谱仪上同时进样，在相同保留时间上根据标准工作溶液与提取物检测样品中有无色谱峰来判定提取物检测样品中有无大麻素成分；

b成分含量测定：对标准工作溶液和提取物检测样品进行进样分析，得到峰面积-浓度标准曲线，之后采用高效液相色谱数据处理软件，按照标准曲线计算出提取物检测样品的大麻素成分含量；

高效液相色谱的检测条件为：高效液相色谱为ThermoFisherU3000LC，色谱柱为ZORBAXSB-C18反向色谱柱，流动相为乙腈和水的混合液，乙腈和水的质量比为60～90：10～40，流速为0.8～1.5mL/min，进样量为10uL，柱温箱温度为25～60℃，数据处理软件为Chromeleon7，检测器为紫外检测器UV检测器为紫外检测器UV的检测波长为220nm。

2.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱检测工业大麻花叶及其提取物中大麻素的方法，其特征在于：在步骤①中，所述的工业大麻花叶为新鲜花叶、干燥后花叶和提取后花叶残渣。

3.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱检测工业大麻花叶及其提取物中大麻素的方法，其特征在于：在步骤①中，大麻花叶的烘烤条件为：在100～140℃的温度下连续烘烤1～3h，花叶粉末的粉碎粒度为10～80目。

4.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱检测工业大麻花叶及其提取物中大麻素的方法，在步骤①中，离心分离的离心转速为1000～4000r/min，离心分离的时间为0.5～10min。

5.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱检测工业大麻花叶及其提取物中大麻素的方法，在步骤①和步骤②中，所述第一提取溶剂和第二提取溶剂均为分析纯甲醇、优级纯甲醇或色谱纯甲醇。

6.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱检测工业大麻花叶及其提取物中大麻素的方法，在步骤①和步骤②中，静置的时间为1～60min，超声提取的时间为1～30min，超声提取的温度为20～60℃，超声功率为120～150W，频率为35～40KHz。

7.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱检测工业大麻花叶及其提取物中大麻素的方法，在步骤①和步骤②中，所述有机微孔滤膜为0.22um或0.25um的尼龙有机滤膜。

8.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱检测工业大麻花叶及其提取物中大麻素的方法，其特征在于：在步骤③中，5～80ug/mL的标准工作溶液为5ug/mL、10ug/mL、20ug/mL、40ug/mL、80ug/mL系列的标准工作溶液。

9.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱检测工业大麻花叶及其提取物中大麻素的方法，其特征在于：在步骤④中，在乙腈和水的混合液中还加入有混合液质量0.01～0.1%的酸试剂，所述酸试剂为冰乙酸、醋酸、甲酸、磷酸中的一种或者几种。技术领域

本发明属于天然植物化学成分提取分离领域技术领域，具体涉及一种高效液相色谱检测工业大麻花叶及其提取物中大麻素的方法。

背景技术

工业大麻指获得合法种植，所含四氢大麻酚(THC)小于0.3％的大麻。目前在云南和黑龙江得到合法种植和加工，2019年工业大麻成为最火热的投资领域，也是大健康产业新兴的热点课题。工业大麻的花叶中含有大麻素族和非大麻素族，被广泛的应用于医药领域。其中大麻素族中主要分为四氢大麻酚(THC)、大麻酚(CBN)、大麻二酚(CBD)、大麻帖酚(CBG)、次大麻二酚(CBDV)、大麻色烯(CBC)、次氢大麻酚(THCV)和屈大麻酚等；非大麻素主要种类有：大麻黄酮类、其他萜类化合物、β谷甾醇类；这些提取物均被广泛应用于医疗行业。

工业大麻中最具价值的成分为大麻二酚(CBD)，CBD是大麻素族中的一种，可以从雌性工业大麻中提取获得，是一种非成瘾性成分。经过研究证实：CBD具有极高的医疗价值，可以治疗多种疾病，CBD有抗焦虑、止疼抗炎、抗癫痫三大作用，CBD也是一种抗氧化剂和神经保护剂，给予其对神经系统的保护作用，可以治疗多种严重的慢性疾病：癫痫、痉挛等。

CBD在医疗应用领域广泛，潜在的医药应用领域包括了癫痫、焦虑、压力、慢性疼痛、保守治疗、食欲刺激、肌肉痉挛、阿尔茨海默病、帕金森综合症、支气管扩张和青光眼治疗等。

在现有工业大麻提取过程中，监测各种大麻素是含量对于提取纯度的控制十分重要。由于工业大麻的认定取决于大麻中所含的四氢大麻酚(THC)的含量，其他的大麻素比如大麻二酚(CBD)、次氢大麻酚(THCV)以及次大麻二酚(CBDV)在薄层色谱和高效液相色谱中往往会存在重叠的现象，加之目前还没有规范的行业标准和相关的检测手段，在行业发展中存在技术壁垒，并且大麻素大多分子量多为接近的异构体，在实际的大麻素含量检测中，往往两种标准品在某些条件下保留时间一致时，就会存在峰值重叠的情况，比如大麻二酚酸(CBDA)、次氢大麻酚(THCV)、大麻帖酚(CBG)、大麻帖酚酸(CBGA)很难做到很好的分离，在相同的保留时间往往同时出峰，从而导致纯度很高，但含量检测结果很低的情况，这对工艺开发带来了极大的困扰，而且目前大多数检验方法仅仅只能简单测定1～4种大麻成分，无法准确地检测多种或者全谱系大麻素的成分含量。另外，现有的文献和相关专利方法检测操作比较繁琐，检测时间比较长，对操作人员要求较高，无法准确、快速完成含量测定。因此，研制开发一种操作简单方便、检测时间短、检验效率高、可同时检测多种大麻素成分；且检测结果稳定、准确的高效液相色谱检测工业大麻花叶及其提取物中大麻素的方法是客观需要的。

发明内容

为了解决背景技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种操作简单方便、检测时间短、检验效率高、可同时检测多种大麻素成分；且检测结果稳定、准确的高效液相色谱检测工业大麻花叶及其提取物中大麻素的方法。

本发明所述的一种高效液相色谱检测工业大麻花叶及其提取物中大麻素的方法，包括以下步骤：

③标准工作溶液的制备：将购买得到的大麻素标准品用甲醇稀释成浓度为5～80ug/mL的标准工作溶液；

④高效液相色谱测定：利用高效液相色谱的检验操作标准对步骤②制得的提取物检测样品和步骤③制得的标准工作液进行进样检测，操作方法如下：

进一步的，在步骤①中，所述的工业大麻花叶为新鲜花叶、干燥后花叶和提取后花叶残渣。

进一步的，在步骤①中，大麻花叶的烘烤条件为：在100～140℃的温度下连续烘烤1～3h，花叶粉末的粉碎粒度为10～80目。

进一步的，在步骤①中，离心分离的离心转速为1000～4000r/min，离心分离的时间为0.5～10min。

进一步的，在步骤①和步骤②中，所述第一提取溶剂和第二提取溶剂均为分析纯甲醇、优级纯甲醇或色谱纯甲醇。

进一步的，在步骤①和步骤②中，静置的时间为1～60min，超声提取的时间为1～30min，超声提取的温度为20～60℃，超声功率为120～150W，频率为35～40KHz。

进一步的，在步骤①和步骤②中，所述有机微孔滤膜为0.22um或0.25um的尼龙有机滤膜。

进一步的，在步骤③中，5～80ug/mL的标准工作溶液为5ug/mL、10ug/mL、20ug/mL、40ug/mL、80ug/mL系列的标准工作溶液。

进一步的，在步骤④中，在乙腈和水的混合液中还加入有混合液质量0.01～0.1％的酸试剂，所述酸试剂为冰乙酸、醋酸、甲酸、磷酸中的一种或者几种。

本发明产生的有益效果是：一是本发明中溶剂的使用量小，对仪器和操作人员的使用要求不好，检测仪器采用高效液相色谱，检测设备的投入成本低，易于大规模的投入使用；二是本发明的检测方法简单便捷，只需要准确称量样品和标准品进行进样分析，通过峰面积-浓度标准曲线，利用高效液相色谱数据处理软件，就能快速、准确的测出大麻素中的多种成分含量，具有出峰时间快，检测时间短，检验的效率高、检测结果准确、稳定优点，适合工业化检测，易于推广使用。

附图说明

图1为标准工作液的色谱图；

图2为花叶提取液的色谱图；

图3为提取物样品的色谱图。

具体实施方式

下面结合实施例和附图对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。

除非另有定义，本文使用的所有的技术和科学术语具有与本发明涉及领域的技术人员通常理解的相同的含义，如在本发明中出现的以下缩写及其对应的物质为：THC为四氢大麻酚、CBD为大麻二酚、CBDV为次大麻二酚、CBDA为大麻二酚酸、CBC为大麻色烯、CBN为大麻酚、CBL为大麻环酚、THCV为次氢大麻酚、CBG为大麻帖酚、CBGA为大麻帖酚酸。

在本发明中，本发明中的高效液相色谱检测可以对花叶提取液中的大麻素含量进行检测，也可以对从花叶提取液中提取的提取物检测样品进行检测，具体的实施方式如下：

对于花叶提取液中大麻素含量的检测方式详见实施例1～3：

实施例1

本实施例1所述的高效液相色谱检测工业大麻花叶的方法，包括以下步骤：

①花叶提取叶的制备：先将大麻花叶置于烘箱中进行烘烤，大麻花叶的烘烤条件为：在100℃的温度下连续烘烤1h，之后将烘烤后的大麻花叶送入粉碎机内粉碎成花叶粉末，花叶粉末的粉碎粒度为10目，所述的工业大麻花叶为新鲜花叶、干燥后花叶和提取后花叶残渣，然后精确称取花叶粉末置于带磨口的三角烧瓶中，并向烧杯加入第一提取溶剂，第一提取溶剂为分析纯甲醇，第一提取溶剂与花叶粉末的质量比为1：90，然后将三角烧瓶密闭、静置后再超声提取，静置的时间为1min，超声提取的时间为1min，超声提取的温度为20℃，超声功率为120W，频率为35KHz，超声提取的过程中向三角烧瓶中加入第一提取溶剂进行补重，提取结束后将提取液放入离心机内进行离心分离，离心分离的离心转速为1000r/min，离心分离的时间为0.5min，离心分离后精确量取上清液于容量瓶中，并用第一提取溶剂定容至刻度线，最后将定容后的上清液经过有机微孔滤膜进行过滤，所述有机微孔滤膜为0.22um尼龙有机滤膜，过滤得到滤液即花叶提取液；

②提取物样品的制备：对花叶提取液进行检测时，提取物检测样品不用制备；

③标准工作溶液的制备：将购买得到的大麻素标准品用甲醇稀释成浓度为5ug/mL的标准工作溶液，大麻素标准品为四氢大麻酚(THC)、大麻二酚(CBD)、次大麻二酚(CBDV)、大麻二酚酸(CBDA)、大麻色烯(CBC)、大麻酚(CBN)、大麻环酚(CBL)、次氢大麻酚(THCV)、大麻帖酚(CBG)和大麻帖酚酸(CBGA)；

④高效液相色谱测定：利用高效液相色谱的检验操作标准对步骤②制得的提取物检测样品和步骤③制得的标准工作液进行进样检测，操作方法如下：

高效液相色谱的检测条件为：高效液相色谱为ThermoFisherU3000LC，色谱柱为ZORBAXSB-C18反向色谱柱，流动相为乙腈和水的混合液，乙腈和水的质量比为60：40，在乙腈和水的混合液中还加入有混合液质量0.01％的酸试剂，所述酸试剂为冰乙酸，流速为0.8mL/min，进样量为10uL，柱温箱温度为25℃，数据处理软件为Chromeleon7，检测器为紫外检测器UV检测器为紫外检测器UV的检测波长为220nm。

实施例2

本实施例2所述的高效液相色谱检测工业大麻花叶的方法，包括以下步骤：

①花叶提取叶的制备：先将大麻花叶置于烘箱中进行烘烤，大麻花叶的烘烤条件为：在120℃的温度下连续烘烤2h，之后将烘烤后的大麻花叶送入粉碎机内粉碎成花叶粉末，花叶粉末的粉碎粒度为50目，所述的工业大麻花叶为新鲜花叶、干燥后花叶和提取后花叶残渣，然后精确称取花叶粉末置于带磨口的三角烧瓶中，并向烧杯加入第一提取溶剂，第一提取溶剂为分析纯甲醇、优级纯甲醇或色谱纯甲醇，第一提取溶剂与花叶粉末的质量比为1：95，然后将三角烧瓶密闭、静置后再超声提取，静置的时间为30min，超声提取的时间为20min，超声提取的温度为40℃，超声功率为135W，频率为38KHz，超声提取的过程中向三角烧瓶中加入第一提取溶剂进行补重，提取结束后将提取液放入离心机内进行离心分离，离心分离的离心转速为2500r/min，离心分离的时间为6min，离心分离后精确量取上清液于容量瓶中，并用第一提取溶剂定容至刻度线，最后将定容后的上清液经过有机微孔滤膜进行过滤，所述有机微孔滤膜为0.25um的尼龙有机滤膜，过滤得到滤液即花叶提取液；

②提取物样品的制备：对花叶提取液进行检测时，提取物检测样品不用制备；

③标准工作溶液的制备：将购买得到的大麻素标准品用甲醇稀释成浓度为20ug/mL的标准工作溶液，大麻素标准品为四氢大麻酚(THC)、大麻二酚(CBD)、次大麻二酚(CBDV)、大麻二酚酸(CBDA)、大麻色烯(CBC)、大麻酚(CBN)、大麻环酚(CBL)、次氢大麻酚(THCV)、大麻帖酚(CBG)和大麻帖酚酸(CBGA)；

④高效液相色谱测定：利用高效液相色谱的检验操作标准对步骤②制得的提取物检测样品和步骤③制得的标准工作液进行进样检测，操作方法如下：

高效液相色谱的检测条件为：高效液相色谱为ThermoFisherU3000LC，色谱柱为ZORBAXSB-C18反向色谱柱，流动相为乙腈和水的混合液，乙腈和水的质量比为80：25，在乙腈和水的混合液中还加入有混合液质量0.6％的酸试剂，所述酸试剂为冰乙酸和醋酸的混合物，流速为1.2mL/min，进样量为10uL，柱温箱温度为45℃，数据处理软件为Chromeleon7，检测器为紫外检测器UV检测器为紫外检测器UV的检测波长为220nm。

实施例3

本实施例3所述的高效液相色谱检测工业大麻花叶的方法，包括以下步骤：

①花叶提取叶的制备：先将大麻花叶置于烘箱中进行烘烤，大麻花叶的烘烤条件为：在140℃的温度下连续烘烤3h，之后将烘烤后的大麻花叶送入粉碎机内粉碎成花叶粉末，花叶粉末的粉碎粒度为80目，所述的工业大麻花叶为新鲜花叶、干燥后花叶和提取后花叶残渣，然后精确称取花叶粉末置于带磨口的三角烧瓶中，并向烧杯加入第一提取溶剂，第一提取溶剂为分析纯甲醇、优级纯甲醇或色谱纯甲醇，第一提取溶剂与花叶粉末的质量比为1：100，然后将三角烧瓶密闭、静置后再超声提取，静置的时间为60min，超声提取的时间为30min，超声提取的温度为60℃，超声功率为150W，频率为40KHz，超声提取的过程中向三角烧瓶中加入第一提取溶剂进行补重，提取结束后将提取液放入离心机内进行离心分离，离心分离的离心转速为4000r/min，离心分离的时间为10min，离心分离后精确量取上清液于容量瓶中，并用第一提取溶剂定容至刻度线，最后将定容后的上清液经过有机微孔滤膜进行过滤，所述有机微孔滤膜为0.22um的尼龙有机滤膜，过滤得到滤液即花叶提取液；

②提取物样品的制备：对花叶提取液进行检测时，提取物检测样品不用制备；

③标准工作溶液的制备：将购买得到的大麻素标准品用甲醇稀释成浓度为10ug/mL的标准工作溶液，大麻素标准品为四氢大麻酚(THC)、大麻二酚(CBD)、次大麻二酚(CBDV)、大麻二酚酸(CBDA)、大麻色烯(CBC)、大麻酚(CBN)、大麻环酚(CBL)、次氢大麻酚(THCV)、大麻帖酚(CBG)和大麻帖酚酸(CBGA)；

④高效液相色谱测定：利用高效液相色谱的检验操作标准对步骤②制得的提取物检测样品和步骤③制得的标准工作液进行进样检测，操作方法如下：

b成分含量测定：对标准工作溶液和提取物检测样品进行进样分析，得到峰面积-浓度标准曲线，之后采用高效液相色谱数据处理软件，按照标准曲线计算出提取物检测样品的大麻素成分含量；高效液相色谱的检测条件为：高效液相色谱为ThermoFisherU3000LC，色谱柱为ZORBAXSB-C18反向色谱柱，流动相为乙腈和水的混合液，乙腈和水的质量比为90：40，在乙腈和水的混合液中还加入有混合液质量0.1％的酸试剂，所述酸试剂为冰乙酸、醋酸和甲酸的混合物，流速为1.5mL/min，进样量为10uL，柱温箱温度为60℃，数据处理软件为

Chromeleon7，检测器为紫外检测器UV检测器为紫外检测器UV的检测波长为220nm。

对于从花叶提取液中提取的提取物检测样品中大麻素含量的检测方式详见实施例4～6：

实施例4

本实施例4所述的高效液相色谱检测从花叶提取液中提取的提取物检测样品的方法，包括以下步骤：

①花叶提取叶的制备：先将大麻花叶置于烘箱中进行烘烤，大麻花叶的烘烤条件为：在100℃的温度下连续烘烤1h，之后将烘烤后的大麻花叶送入粉碎机内粉碎成花叶粉末，花叶粉末的粉碎粒度为10目，所述的工业大麻花叶为新鲜花叶、干燥后花叶和提取后花叶残渣，然后精确称取花叶粉末置于带磨口的三角烧瓶中，并向烧杯加入第一提取溶剂，第一提取溶剂为分析纯甲醇，第一提取溶剂与花叶粉末的质量比为1：90，然后将三角烧瓶密闭、静置后再超声提取，静置的时间为1min，超声提取的时间为1min，超声提取的温度为20℃，超声功率为120W，频率为35KHz，超声提取的过程中向三角烧瓶中加入第一提取溶剂进行补重，提取结束后将提取液放入离心机内进行离心分离，离心分离的离心转速为1000r/min，离心分离的时间为0.5min，离心分离后精确量取上清液于容量瓶中，并用第一提取溶剂定容至刻度线，最后将定容后的上清液经过有机微孔滤膜进行过滤，所述有机微孔滤膜为0.22um的尼龙有机滤膜，过滤得到滤液即花叶提取液；

②提取物样品的制备：将步骤①制得的花叶提取液精确称取后置于带磨口的三角烧瓶中，并准确向三角烧瓶中加入第二提取溶剂，第二提取溶剂均为分析纯甲醇，第二提取溶剂与花叶提取液的质量比为0.5：450，然后将三角烧瓶密闭、静置后进行超声溶解得到溶解液，静置的时间为1min，超声提取的时间为1min，超声提取的温度为20℃，超声功率为120W，频率为35KHz，超声溶解的过程中向三角烧瓶中加入第二提取溶剂进行补重，之后将补重后的溶解液经过有机微孔滤膜进行过滤，所述有机微孔滤膜为0.22um的尼龙有机滤膜，过滤得到的滤液即为提取物检测样品；

③标准工作溶液的制备：将购买得到的大麻素标准品用甲醇稀释成浓度为20g/mL的标准工作溶液，大麻素标准品为四氢大麻酚(THC)、大麻二酚(CBD)、次大麻二酚(CBDV)、大麻二酚酸(CBDA)、大麻色烯(CBC)、大麻酚(CBN)、大麻环酚(CBL)、次氢大麻酚(THCV)、大麻帖酚(CBG)和大麻帖酚酸(CBGA)；

④高效液相色谱测定：利用高效液相色谱的检验操作标准对步骤②制得的提取物检测样品和步骤③制得的标准工作液进行进样检测，操作方法如下：

高效液相色谱的检测条件为：高效液相色谱为ThermoFisherU3000LC，色谱柱为ZORBAXSB-C18反向色谱柱，流动相为乙腈和水的混合液，乙腈和水的质量比为60：40，在乙腈和水的混合液中还加入有混合液质量0.01％的酸试剂，所述酸试剂为冰乙酸、醋酸、甲酸、磷酸中的一种或者几种，流速为0.8mL/min，进样量为10uL，柱温箱温度为25℃，数据处理软件为Chromeleon7，检测器为紫外检测器UV检测器为紫外检测器UV的检测波长为220nm。

实施例5

本实施例5所述的高效液相色谱检测从花叶提取液中提取的提取物检测样品的方法，包括以下步骤：

①花叶提取叶的制备：先将大麻花叶置于烘箱中进行烘烤，大麻花叶的烘烤条件为：在120℃的温度下连续烘烤2h，之后将烘烤后的大麻花叶送入粉碎机内粉碎成花叶粉末，花叶粉末的粉碎粒度为60目，所述的工业大麻花叶为新鲜花叶、干燥后花叶和提取后花叶残渣，然后精确称取花叶粉末置于带磨口的三角烧瓶中，并向烧杯加入第一提取溶剂，第一提取溶剂为优级纯甲醇，第一提取溶剂与花叶粉末的质量比为1：95，然后将三角烧瓶密闭、静置后再超声提取，静置的时间为45min，超声提取的时间为25min，超声提取的温度为40℃，超声功率为140W，频率为38KHz，超声提取的过程中向三角烧瓶中加入第一提取溶剂进行补重，提取结束后将提取液放入离心机内进行离心分离，离心分离的离心转速为2500r/min，离心分离的时间为7min，离心分离后精确量取上清液于容量瓶中，并用第一提取溶剂定容至刻度线，最后将定容后的上清液经过有机微孔滤膜进行过滤，所述有机微孔滤膜为0.25um的尼龙有机滤膜，过滤得到滤液即花叶提取液；

②提取物样品的制备：将步骤①制得的花叶提取液精确称取后置于带磨口的三角烧瓶中，并准确向三角烧瓶中加入第二提取溶剂，第二提取溶剂均为优级纯甲醇，第二提取溶剂与花叶提取液的质量比为0.5：480，然后将三角烧瓶密闭、静置后进行超声溶解得到溶解液，静置的时间为45min，超声提取的时间为25min，超声提取的温度为40℃，超声功率为135W，频率为38KHz，超声溶解的过程中向三角烧瓶中加入第二提取溶剂进行补重，之后将补重后的溶解液经过有机微孔滤膜进行过滤，所述有机微孔滤膜为0.25um的尼龙有机滤膜，过滤得到的滤液即为提取物检测样品；

③标准工作溶液的制备：将购买得到的大麻素标准品用甲醇稀释成浓度为40ug/mL的标准工作溶液，大麻素标准品为四氢大麻酚(THC)、大麻二酚(CBD)、次大麻二酚(CBDV)、大麻二酚酸(CBDA)、大麻色烯(CBC)、大麻酚(CBN)、大麻环酚(CBL)、次氢大麻酚(THCV)、大麻帖酚(CBG)和大麻帖酚酸(CBGA)；

④高效液相色谱测定：利用高效液相色谱的检验操作标准对步骤②制得的提取物检测样品和步骤③制得的标准工作液进行进样检测，操作方法如下：

b成分含量测定：对标准工作溶液和提取物检测样品进行进样分析，得到峰面积-浓度标准曲线，之后采用高效液相色谱数据处理软件，按照标准曲线计算出提取物检测样品的麻素成分含量；

高效液相色谱的检测条件为：高效液相色谱为ThermoFisherU3000LC，色谱柱为ZORBAXSB-C18反向色谱柱，流动相为乙腈和水的混合液，乙腈和水的质量比为80：25，在乙腈和水的混合液中还加入有混合液质量0.07％的酸试剂，所述酸试剂为磷酸，流速为1.5mL/min，进样量为10uL，柱温箱温度为60℃，数据处理软件为Chromeleon7，检测器为紫外检测器UV检测器为紫外检测器UV的检测波长为220nm。

实施例6

本实施例6所述的高效液相色谱检测从花叶提取液中提取的提取物检测样品的方法，包括以下步骤：

①花叶提取叶的制备：先将大麻花叶置于烘箱中进行烘烤，大麻花叶的烘烤条件为：在140℃的温度下连续烘烤3h，之后将烘烤后的大麻花叶送入粉碎机内粉碎成花叶粉末，花叶粉末的粉碎粒度为80目，所述的工业大麻花叶为新鲜花叶、干燥后花叶和提取后花叶残渣，然后精确称取花叶粉末置于带磨口的三角烧瓶中，并向烧杯加入第一提取溶剂，第一提取溶剂为色谱纯甲醇，第一提取溶剂与花叶粉末的质量比为1：100，然后将三角烧瓶密闭、静置后再超声提取，静置的时间为60min，超声提取的时间为30min，超声提取的温度为60℃，超声功率为150W，频率为40KHz，超声提取的过程中向三角烧瓶中加入第一提取溶剂进行补重，提取结束后将提取液放入离心机内进行离心分离，离心分离的离心转速为4000r/min，离心分离的时间为10min，离心分离后精确量取上清液于容量瓶中，并用第一提取溶剂定容至刻度线，最后将定容后的上清液经过有机微孔滤膜进行过滤，所述有机微孔滤膜为0.25um的尼龙有机滤膜，过滤得到滤液即花叶提取液；

②提取物样品的制备：将步骤①制得的花叶提取液精确称取后置于带磨口的三角烧瓶中，并准确向三角烧瓶中加入第二提取溶剂，第二提取溶剂均为色谱纯甲醇，第二提取溶剂与花叶提取液的质量比为0.5：500，然后将三角烧瓶密闭、静置后进行超声溶解得到溶解液，静置的时间为60min，超声提取的时间为30min，超声提取的温度为60℃，超声功率为150W，频率为40KHz，超声溶解的过程中向三角烧瓶中加入第二提取溶剂进行补重，之后将补重后的溶解液经过有机微孔滤膜进行过滤，所述有机微孔滤膜为0.25um的尼龙有机滤膜，过滤得到的滤液即为提取物检测样品；

③标准工作溶液的制备：将购买得到的大麻素标准品用甲醇稀释成浓度为80ug/mL的标准工作溶液，大麻素标准品为四氢大麻酚(THC)、大麻二酚(CBD)、次大麻二酚(CBDV)、大麻二酚酸(CBDA)、大麻色烯(CBC)、大麻酚(CBN)、大麻环酚(CBL)、次氢大麻酚(THCV)、大麻帖酚(CBG)和大麻帖酚酸(CBGA)；

④高效液相色谱测定：利用高效液相色谱的检验操作标准对步骤②制得的提取物检测样品和步骤③制得的标准工作液进行进样检测，操作方法如下：

高效液相色谱的检测条件为：高效液相色谱为ThermoFisherU3000LC，色谱柱为ZORBAXSB-C18反向色谱柱，流动相为乙腈和水的混合液，乙腈和水的质量比为90：40，在乙腈和水的混合液中还加入有混合液质量0.1％的酸试剂，所述酸试剂为冰乙酸、醋酸、甲酸和磷酸的混合物，流速为1.5mL/min，进样量为10uL，柱温箱温度为60℃，数据处理软件为Chromeleon7，检测器为紫外检测器UV检测器为紫外检测器UV的检测波长为220nm。