摘 要：本发明提供了一种脱羧原位萃取富集汉麻叶片中的大麻二酚的方法，包括：步骤1：将汉麻叶片进行粉碎；步骤2：将粉碎后的汉麻叶片加入高浓乙醇中进行低温逆流萃取或浸泡搅拌得到大麻二酚醇提液；步骤3：对大麻二酚醇提液进行乙醇回收；步骤4：对乙醇回收后的大麻二酚醇提液加水加热进行脱羧反应；步骤5：设置回流装置，在脱羧反应后的大麻二酚醇提液在加热湍动的状态下加入萃取剂进行萃取；步骤6：对萃取后的大麻二酚合并有机相后减压回收得到大麻二酚浸膏，将大麻二酚浸膏经键和硅胶柱层析分离，结晶得到大麻二酚晶体。本发明通过含氯原子的数量的调控可实现化学极性可控，所得浸膏大麻二酚回收率高，且黏度大大降低，规模化生产重复性好。
权利要求
1.一种脱羧原位萃取富集汉麻叶片中的大麻二酚的方法，其特征在于，所述一种脱羧原位萃取富集汉麻叶片中大麻二酚的方法是通过如下步骤实现的：
步骤1：将汉麻叶片进行粉碎，得到粉碎后的汉麻叶片；
步骤2：将所述粉碎后的汉麻叶片加入高浓乙醇中进行低温逆流萃取或者浸泡搅拌得到大麻二酚醇提液；
步骤3：对所述大麻二酚醇提液进行乙醇回收，得到乙醇回收后的大麻二酚醇提液；
步骤4：对所述乙醇回收后的大麻二酚醇提液进行加水至大麻二酚醇提液体积分数为50％-65％、加热至85-105℃进行脱羧反应，得到脱羧反应后的大麻二酚醇提液；
步骤5：设置回流装置，并在所述脱羧反应后的大麻二酚醇提液在加热湍动的状态下加入萃取剂进行萃取1-3h，将大麻二酚富集于有机相中，冷却后进行自然分层，得到萃取后的大麻二酚；
步骤6：对所述萃取后的大麻二酚合并有机相后减压回收得到大麻二酚浸膏，并将所述大麻二酚浸膏经键和硅胶柱层析分离后，结晶得到大麻二酚晶体。
2.根据权利要求1所述的一种脱羧原位萃取富集汉麻叶片中的大麻二酚的方法，其特征在于，所述步骤2中粉碎后的汉麻叶片与高浓乙醇的体积比为1g：10-20mL，高浓乙醇的体积分数为85％-95％。
3.根据权利要求1所述的一种脱羧原位萃取富集汉麻叶片中的大麻二酚的方法，其特征在于，所述步骤2中低温逆流萃取的温度为-30-25℃，低温逆流萃取的时间为1-4h。
4.根据权利要求1所述的一种脱羧原位萃取富集汉麻叶片中的大麻二酚的方法，其特征在于，所述步骤2中浸泡搅拌的温度为0-25℃，浸泡搅拌的时间为6-12h。
5.根据权利要求1所述的一种脱羧原位萃取富集汉麻叶片中的大麻二酚的方法，其特征在于，所述步骤3中乙醇回收的体积为所述大麻二酚醇提液的1/3-3/4。
6.根据权利要求1所述的一种脱羧原位萃取富集汉麻叶片中的大麻二酚的方法，其特征在于，所述步骤5中萃取剂包括含氯溶剂和提取液，含氯溶剂与提取液的体积比为1:1-3；
含氯溶剂为一氯甲烷、二氯甲烷、氯仿、一氯乙烷、二氯乙烷的其中一种。
7.根据权利要求6所述的一种脱羧原位萃取富集汉麻叶片中的大麻二酚的方法，其特征在于，所述步骤5中萃取时间为1-3h，萃取温度为85-105℃。
8.根据权利要求7所述的一种脱羧原位萃取富集汉麻叶片中的大麻二酚的方法，其特征在于，所述步骤5中萃取方法为脱羧原位萃取法，萃取次数为1-4次。
9.根据权利要求1所述的一种脱羧原位萃取富集汉麻叶片中的大麻二酚的方法，其特征在于步骤6中结晶得大麻二酚晶体的方法为：
将所述大麻二酚浸膏进行复溶，将复溶后的大麻二酚浸膏经C18烷基链键和硅胶柱进行层析分离，将层析分离后的大麻二酚浸膏放入醚类溶剂中进行结晶得到纯度超过95％的大麻二酚晶体。
技术领域
本发明属于化合物提取技术领域，更具体地说，是涉及一种脱羧原位萃取富集汉麻叶片中的大麻二酚的方法。
背景技术
大麻二酚((-)-Cannabidiol)，简称CBD，分子式为C21H30O2，是一种从工业大麻中提取的天然化合物，性状为白色至淡黄色树脂或结晶，熔点为66℃-67℃，几乎不溶于水，溶于乙醇、甲醇、乙醚、苯、氯仿等有机溶剂。
CBD具有阻断某些多酚对人体神经系统的不利影响，并且具有阻断乳腺癌转移。CBD可以帮助控制人类大脑中GABA神经递质的消耗量，抑制大脑中枢兴奋性，降低癫痫发作，还可以帮助提高其他抗癫痫药物的疗效。大麻二酚可与CB1受体作用，抑制中脑导水管周围灰质和RVM内的γ-氨基丁酸，以及脊髓内谷氨酸的释放来达到镇痛效果。CBD还可与CB2受体作用减弱神经生长因子诱发的肥大细胞脱颗粒以及嗜中性粒细胞聚集来抑制过敏性炎症，并由此介导免疫抑制作用，达到消炎止痛的效果，且效果强于人们所熟知和广泛运用的阿司匹林。CBD具有治疗多发性硬化症、抗类风湿关节炎、抗失眠等一系列生理活性，CBD能够帮助内源性大麻素维持在一个合理的水平，让人身体感觉良好、愉悦，又不会像四氢大麻酚一样成瘾。
中国专利CN108314608B“一种大麻二酚的提取分离方法”采用醇提取后，碱性溶液增强大麻二酚的水溶性，用有机溶剂萃取富集大麻二酚，经聚酰胺树脂柱、中性氧化铝和键合硅胶柱纯化富集，结晶获得高纯度的大麻二酚。本发明专利技术采用碱性溶液污染环境，排放受阻，不便于大规模应用。中国专利CN106278828A“一种从大麻中提取大麻二酚的方法”将大麻药材粉末采用30-100％(V/V)的乙醇提取；将提取液浓缩得浸膏后水沉，去除杂质得到水沉液；将水沉液离心并向获得的沉淀中加入10-100％(V/V)乙醇，溶解得到沉淀物的醇溶液；将沉淀物的醇溶液进行柱层析，在洗脱液中加入乙醇过饱和溶解，获得结晶物干燥。本发明专利技术中的水沉操作会使水溶性不良的CBD沉降，降低CBD的回收率。中国专利CN103351373A“一种从汉麻中提取纯化大麻二酚的方法技术”采用超临界CO2萃取技术从汉麻成熟期花叶中提取大麻二酚成分，利用大孔吸附树脂和快速纯化系统对大麻二酚提取物进一步纯化，得到的大麻二酚产品含量超过98％，且不含有精神毒性成分四氢大麻酚。本发明专利技术产品收率高纯度高，满足了汉麻高附加值产品开发的需要，尤其在制药领域具有非常大的应用优势。但超临界萃取技术设备固定资产一次性投入很大，且设备处理量有限，不适合大规模生产。中国专利CN103351373A“一种微波辅助提取大麻二酚及其制备的方法技术”所述的大麻二酚的百分含量为≥95％，四氢大麻酚的含量未检出。此发明专利技术解决了现有工艺提取时间长、效率低的问题，但微波辅助萃取技术设备固定资产一次性投入很大，且设备处理量有限，不适合大规模生产。中国专利CN110256206A“一种高速逆流色谱分离提取大麻二酚的方法”将工业大麻花叶干燥、粉碎，采用甲醇或乙醇提取大麻二酚，得到大麻二酚醇提液，用石油醚萃取并去除石油醚得萃取物，将萃取物采用高速逆流色谱法进行分离，收集洗脱液浓缩、结晶获得大麻二酚产品。此发明专利技术所用石油醚沸点不均一，回收难度大，且气味较大，不适合大规模生产。
发明内容
本发明的目的在于提供一种脱羧原位萃取富集汉麻叶片中的大麻二酚的方法，旨在解决现有技术中大麻二酚萃取时间长、回收率低的技术问题。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：提供一种脱羧原位萃取富集汉麻叶片中的大麻二酚的方法，包括：
步骤1：将汉麻叶片进行粉碎，得到粉碎后的汉麻叶片；
步骤2：将粉碎后的汉麻叶片加入高浓乙醇中进行低温逆流萃取或者浸泡搅拌得到大麻二酚醇提液；
步骤3：对大麻二酚醇提液进行乙醇回收，得到乙醇回收后的大麻二酚醇提液；
步骤4：对乙醇回收后的大麻二酚醇提液进行加水至大麻二酚醇提液体积分数为50％-65％、加热至85-105℃进行脱羧反应，得到脱羧反应后的大麻二酚醇提液；
步骤5：设置回流装置，并在脱羧反应后的大麻二酚醇提液在加热湍动的状态下加入萃取剂进行萃取1-3h，将大麻二酚富集于有机相中，冷却后进行自然分层，得到萃取后的大麻二酚；
步骤6：对萃取后的大麻二酚合并有机相后减压回收得到大麻二酚浸膏，并将大麻二酚浸膏经键和硅胶柱层析分离后，结晶得到大麻二酚晶体。
可选的，步骤2中粉碎后的汉麻叶片与高浓乙醇的体积比为1g：10-20mL，高浓乙醇的体积分数为85％-95％。
可选的，步骤2中低温逆流萃取的温度为-30-25℃，低温逆流萃取的时间为1-4h。
可选的，步骤2中浸泡搅拌的温度为0-25℃，浸泡搅拌的时间为6-12h。
可选的，步骤3中乙醇回收的体积为大麻二酚醇提液的1/3-3/4。
可选的，步骤5中萃取剂包括含氯溶剂和提取液，含氯溶剂与提取液的体积比为1:1-3；
含氯溶剂为一氯甲烷、二氯甲烷、氯仿、一氯乙烷、二氯乙烷的其中一种。
可选的，步骤5中萃取时间为1-3h，萃取温度为85-105℃。
可选的，步骤5中萃取方法为脱羧原位萃取法，萃取次数为1-4次。
可选的，步骤6中并将大麻二酚浸膏经键和硅胶柱层析分离后，结晶得CBD晶体，包括：将大麻二酚浸膏进行复溶，将复溶后的大麻二酚浸膏经C18烷基链键和硅胶柱进行层析分离，将层析分离后的大麻二酚浸膏放入醚类溶剂中进行结晶得到纯度超过95％的大麻二酚晶体。
本发明提供的一种脱羧原位萃取富集汉麻叶片中的大麻二酚的方法与系统的有益效果为：
(1)本发明高浓乙醇溶液低温萃取能防止水溶性杂质的溶出，提取物澄清透明。
(2)本发明高温脱羧与液液萃取同时完成，不仅分子运动快节约萃取时间，而且节约有机溶剂的用量，含氯溶剂毒性小，安全系数高，价格便宜，分子量较大，分层良好，为回收有机溶剂降低成本。
(3)本发明通过含氯原子的数量的调控可实现化学极性可控，大麻二酚易于富集于有机相中，所得大麻二酚浸膏回收率高，且黏度大大降低，规模化生产重复性好。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例提供的一种脱羧原位萃取富集汉麻叶片中的大麻二酚的方法的流程图；
图1
图2为本发明实施例提供的大麻二酚和四氢大麻酚的标准曲线图；
图2
图3为本发明实施例提供的大麻二酚标准品和汉麻叶提取液的高效液相色谱图。
图3
具体实施方式
为了使本发明所要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
根据图1-3对本实施例进行说明，本发明提出的脱羧原位萃取富集汉麻叶片中的大麻二酚的方法具体步骤如下：
(1)取10.00g粉碎后汉麻叶片，以料液比1:10g/mL加入95％乙醇中，浸泡搅拌12h所得大麻二酚醇提液，所得提取液经高效液相色谱检测测得大麻二酚含量为32.97mg/g；
(2)减压回收醇提液中部分乙醇后，加水至乙醇体积分数为62％，再加入水相体积一半的二氯甲烷，105℃回流进行脱羧原位萃取2.0h，冷却后自然分层，大麻二酚富集于下层有机相中，此过程重复进行两次，合并有机相检测CBD回收率为127％，减压回收二氯甲烷得大麻二酚浸膏。
(3)95％的乙醇复溶浸膏，经柱反相硅胶层析分离后结晶，检测大麻二酚的回收率为99.54％，纯度为93.24％。
实施例2
根据图1-3对本实施例进行说明，本发明提出的脱羧原位萃取富集汉麻叶片中的大麻二酚的方法具体步骤如下：
(1)取50.00g粉碎后汉麻叶片，以料液比1:10g/mL加入85％乙醇中，浸泡搅拌24h所得大麻二酚醇提液，所得提取液经高效液相色谱检测测得大麻二酚含量为34.45mg/g；
(2)减压回收醇提液中部分乙醇后，加水至乙醇体积分数为55％，再加入水相体积一半的二氯甲烷，105℃回流进行脱羧原位萃取2.0h，冷却后自然分层，大麻二酚富集于下层有机相中，此过程重复进行两次，合并有机相检测CBD回收率为125％，减压回收二氯甲烷得大麻二酚浸膏。
(3)95％的乙醇复溶浸膏，经柱反相硅胶层析分离后结晶，检测大麻二酚的回收率为101.33％，纯度为94.54％。
实施例3
根据图1-3对本实施例进行说明，本发明提出的脱羧原位萃取富集汉麻叶片中的大麻二酚的方法具体步骤如下：
(1)取100.00g粉碎后汉麻叶片，以料液比1:10g/mL加入90％乙醇中，浸泡搅拌12h所得大麻二酚醇提液，所得提取液经高效液相色谱检测测得大麻二酚含量为33.29mg/g；
(2)减压回收醇提液中部分乙醇后，加水至乙醇体积分数为60％，再加入水相体积一半的二氯甲烷，105℃回流进行脱羧原位萃取2.0h，冷却后自然分层，大麻二酚富集于下层有机相中，此过程重复进行两次，合并有机相检测CBD回收率为128％，减压回收二氯甲烷得大麻二酚浸膏。
(3)95％的乙醇复溶浸膏，经柱反相硅胶层析分离后结晶，检测大麻二酚的回收率为102.76％，纯度为95.03％。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
摘自国家发明专利，发明人：梁德权，潘高峰，梁冰，刘传海，杨新宇，李党国，杜显生，李贤勇；申请号：202311754072.0；申请日：2023.12.20
