摘  要：本发明属于生物活性肽技术领域，尤其涉及一种汉麻降血脂肽组合物及其应用。为解决汉麻籽粕资源利用不足的问题，本发明提供了一种汉麻降血脂肽组合物，包括质量比为4:5的氨基酸序列为Val-Ser-Glu-Pro-Arg的五肽和氨基酸序列为Ile-Asp-Lys-Phe-Ser-Arg的六肽。本发明由汉麻籽粕经酶解及1KD超滤膜过滤获得的小分子肽组合物中谷氨酸、精氨酸含量较高，特殊的氨基酸序列使汉麻降血脂肽组合物在人体吸收代谢中表现出显著的血脂调节功效，将本发明汉麻降血脂肽组合物应用于降血脂药品、保健食品以及食品添加剂中，能够阻碍肠道内的胆固醇吸收，促使胆固醇排出体外，从而降低血胆固醇浓度。

 

技术要点

1.一种汉麻降血脂肽组合物，其特征在于，主要包括氨基酸序列为Val-Ser-Glu-Pro-

Arg的五肽和氨基酸序列为Ile-Asp-Lys-Phe-Ser-Arg的六肽。

2.根据权利要求1所述一种汉麻降血脂肽组合物，其特征在于，所述五肽和六肽的质量比为4:5。

3.根据权利要求1或2所述一种汉麻降血脂肽组合物，其特征在于，所述五肽的分子量为680Da。

4.根据权利要求3所述一种汉麻降血脂肽组合物，其特征在于，所述五肽的谷氨酸含量为140.97mg/g，精氨酸含量为89.0mg/g。

5.根据权利要求4所述一种汉麻降血脂肽组合物，其特征在于，所述六肽的分子量为876Da。

6.根据权利要求5所述一种汉麻降血脂肽组合物，其特征在于，所述汉麻降血脂肽组合物的制备方法为：汉麻籽粕与蒸馏水按一定料液比混合，向混合液中加入木瓜蛋白酶和中性蛋白酶，在一定温度下酶解得到酶解液，升温灭酶，将酶解液离心后取上清液，经1KD超滤膜过滤获得分子量＜1KD的汉麻降血脂肽组合物，低温冻干获得汉麻降血脂肽冻干粉。

7.根据权利要求6所述一种汉麻降血脂肽组合物，其特征在于，所述料液比为1g:10g。

8.根据权利要求7所述一种汉麻降血脂肽组合物，其特征在于，所述木瓜蛋白酶的酶活为80万u/g、加入量为混合液质量的0.2～0.6％；所述中性蛋白酶的酶活为13万u/g、加入量为混合液质量的2.0～3.0％。

9.根据权利要求8所述一种汉麻降血脂肽组合物，其特征在于，所述酶解温度为60～70℃，酶解时间为1～3h；所述灭酶温度为90～100℃，灭酶时间为10～20min。10.如权利要求1-9任一所述一种汉麻降血脂肽组合物在降血脂药品、保健食品以及食品添加剂中的应用。

 

技术领域

本发明属于生物活性肽技术领域，尤其涉及一种汉麻降血脂肽组合物及其应用。

 

背景技术

血脂异常是冠心病、心梗和缺血性脑卒中等心脑血管病的独立而重要危险因素之一，严重危害人体健康。目前临床用于治疗高血脂多应用阿昔莫司、辛伐他汀、考来烯胺等化学药物，虽然具有良好的疗效，但长期服用会产生肝肾损伤、横纹肌溶解等诸多不良反应。因此从天然动植物资源中筛选安全、无副作用的降血脂活性物质，已成为国内外学者研究的新趋势。

生物活性肽是指对生物机体的生命活动有益或具有生理作用的肽类化合物。生物活性肽的结构可以从简单的二肽到较大分子的多肽。作为基础营养物质，活性肽的生物利用度高，比蛋白质更易吸收，同时具有多种生物学功能，如免疫调节、抗血栓、降血压、降胆固醇、抗癌、抗氧化等。

汉麻(Cannabissativa)是大麻科大麻属一年生草本植物，又名火麻，是最古老的栽培作物之一。汉麻籽作为食品和油料，含有丰富的营养成分，包括约25～35％的脂肪酸、0～25％的蛋白质、20～30％的碳水化合物和10～15％的纤维以及各种矿物质。由于其含有丰富的人体必需氨基酸和必需脂肪酸，并且具有合理的组成比例，所以被认为是现今最完整的营养来源，是理想的生物活性多肽来源。

但在大部分汉麻产区，汉麻籽仅用于汉麻籽油的提取，而含有丰富蛋白质的汉麻籽粕则被废弃或用作饲料，导致汉麻籽资源的浪费。

 

发明内容

为解决汉麻籽粕资源利用不足的问题，本发明提供了一种汉麻降血脂肽组合物及其应用。

本发明的技术方案：

一种汉麻降血脂肽组合物，主要包括氨基酸序列为Val-Ser-Glu-Pro-Arg的五肽和氨基酸序列为Ile-Asp-Lys-Phe-Ser-Arg的六肽。

进一步的，所述五肽和六肽的质量比为4:5。

进一步的，所述五肽的分子量为680Da。

进一步的，所述五肽的谷氨酸含量为140.97mg/g，精氨酸含量为89.0mg/g。

进一步的，所述六肽的分子量为876Da。

进一步的，所述汉麻降血脂肽组合物的制备方法为：汉麻籽粕与蒸馏水按一定料液比混合，向混合液中加入木瓜蛋白酶和中性蛋白酶，在一定温度下酶解得到酶解液，升温灭酶，将酶解液离心后取上清液，经1KD超滤膜过滤获得分子量＜1KD的汉麻降血脂肽组合物，低温冻干获得汉麻降血脂肽冻干粉。

进一步的，所述料液比为1g:10g。

进一步的，所述木瓜蛋白酶的酶活为80万u/g、加入量为混合液质量的0.2～

0.6％；所述中性蛋白酶的酶活为13万u/g、加入量为混合液质量的2.0～3.0％。

进一步的，所述酶解温度为60～70℃，酶解时间为1～3h；所述灭酶温度为90～100℃，灭酶时间为10～20min。

本发明一种汉麻降血脂肽组合物在降血脂药品、保健食品以及食品添加剂中的应用。

 

本发明的有益效果：

本发明提供的汉麻降血脂肽组合物中五肽含有的必需氨基酸含量占总氨基酸的25.19％，五肽中的谷氨酸、精氨酸含量较高，分别为140.97mg/g、89.0mg/g。特殊的氨基酸序列使汉麻降血脂肽组合物在人体吸收代谢中表现出显著的血脂调节功效，能够阻碍肠道内的胆固醇吸收，促使胆固醇排出体外，从而降低血胆固醇浓度。本发明提供的汉麻降血脂肽组合物对胆酸钠、牛黄胆酸钠、甘氨胆酸钠的吸附率分别为85.02％、25.12％、58.10％。

汉麻籽粕是药食同源食品原料，本发明充分发挥汉麻籽多肽的营养和医疗保健功效，拓展汉麻籽多肽在功能食品、医药等领域中的应用，提高汉麻籽深加工的附加值，且制备工艺简单，适于规模化生产。

 

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步的说明，但并不局限于此，凡是对本发明技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的保护范围中。

实施例1

一种汉麻降血脂肽组合物，主要包括氨基酸序列为Val-Ser-Glu-Pro-Arg的五肽和氨基酸序列为Ile-Asp-Lys-Phe-Ser-Arg的六肽。

实施例2

一种汉麻降血脂肽组合物，主要包括氨基酸序列为Val-Ser-Glu-Pro-Arg的五肽和氨基酸序列为Ile-Asp-Lys-Phe-Ser-Arg的六肽，五肽和六肽的质量比为4:5。

五肽的分子量为680Da，谷氨酸含量为140.97mg/g，精氨酸含量为89.0mg/g，必需氨基酸含量占总氨基酸25.19％。

六肽的分子量为876Da。

实施例3

本实施例提供了一种汉麻降血脂肽组合物的制备方法：

汉麻籽粕与蒸馏水按一定料液比混合，向混合液中加入木瓜蛋白酶和中性蛋白酶，在一定温度下酶解得到酶解液，升温灭酶，将酶解液离心后取上清液，经1KD超滤膜过滤获得分子量＜1KD的汉麻降血脂肽组合物，低温冻干获得汉麻降血脂肽冻干粉。

实施例4

本实施例提供了一种汉麻降血脂肽组合物的制备方法：

汉麻籽粕与蒸馏水按料液比1g:10g混合，向混合液中加入木瓜蛋白酶和中性蛋白酶，木瓜蛋白酶的酶活为80万u/g、加入量为混合液质量的0.2～0.6％；中性蛋白酶的酶活为13万u/g、加入量为混合液质量的2.0～3.0％。

在60～70℃温度下酶解1～3h得到酶解液，将酶解液升温至90～100℃灭酶10～20min使酶失活，将酶解液离心后取上清液，经1KD超滤膜过滤获得分子量＜1KD的汉麻降血脂肽组合物，低温冻干获得汉麻降血脂肽冻干粉。

实施例5

本实施例提供了一种汉麻降血脂肽组合物的制备方法：

汉麻籽粕与蒸馏水按料液比1g:10g混合，向混合液中加入木瓜蛋白酶和中性蛋白

酶，木瓜蛋白酶的酶活为80万u/g、加入量为混合液质量的0.2～0.6％；中性蛋白酶的酶活为13万u/g、加入量为混合液质量的2.0～3.0％。

在65℃温度下酶解2.5h得到酶解液，将酶解液升温至95℃灭酶15min使酶失活，将酶解液离心后取上清液，经1KD超滤膜过滤获得分子量＜1KD的汉麻降血脂肽组合物，低温冻干获得汉麻降血脂肽冻干粉。

实施例6

本实施例制备了不同分子量的汉麻籽粕多肽，制备方法为：

汉麻籽粕与蒸馏水按料液比1g:10g混合，向混合液中加入木瓜蛋白酶和中性蛋白酶，木瓜蛋白酶的酶活为80万u/g、加入量为混合液质量的0.2～0.6％；中性蛋白酶的酶活为13万u/g、加入量为混合液质量的2.0～3.0％。

在65℃温度下酶解2.5h得到酶解液，将酶解液升温至95℃灭酶15min使酶失活，将酶解液离心后取上清液，采用超滤膜过滤系统对酶解汉麻籽粕多肽混合液进行分离，采用截留分子量分别为1KD，3KD，5KD的超滤膜对混合多肽进行分离，得到4种不同分子量的多肽组分，各个组分和分子量范围如表1所示：

表1

对分离所得4种不同分子量的多肽组分结合胆酸盐能力进行评价，评价方法如下：

(1)绘制胆酸盐的标准曲线

配制胆酸盐标准液：分别准确称取胆酸盐0、20、40、60、80、100、120、140、160、180和200mg各置于100mL容量瓶中，以蒸馏水溶解并加至刻度。取不同质量浓度的胆酸盐标准液1mL于具塞试管中，加入45％硫酸6mL，混匀；加入0.3％糠醛1mL，混匀；于65℃恒温水浴中反应30min，冷却至室温后，于620nm波长处测吸光度，绘制标准曲线。

(2)汉麻籽多肽对胆酸盐吸附作用的测定

分别吸取5～10mg/ml的组分a、b、c、d四种多肽组分，分别加入0.5～2ml人工胃液，在37℃，恒温水浴1～3h；调节pH至6～7，加入1～3ml人工肠液，在37℃，恒温震荡1～3h；分别加入2ml牛黄胆酸钠、胆酸钠、甘氨胆酸钠，在37℃，恒温震荡1～3h,经离心，取上清液1ml，加入45％硫酸6ml、0.3％糠醛1ml,65℃，恒温水浴30～60min；在620nm处检测吸光度，根据吸光度值计算四种多肽组分对胆酸盐的吸附率，实验结果如表2所示，

表2

 

由表2可知，汉麻籽多肽组分对3类代表性胆酸盐均具有吸附作用，其中组分d，即汉麻降血脂肽组合物的吸附能力明显大于其它三个组分，对胆酸钠吸附率为85.02％，对较难被吸附的牛磺胆酸钠的吸附率也高于20％，达到25.12％。因此可初步确定组分d中具有较强降血脂作用的功能因子。实验以胆酸钠、甘氨胆酸钠和牛磺胆酸钠作为吸附对象，揭示了汉麻籽多肽通过吸附胆酸盐，抑制其在肠道的吸收并将其排出体外，从而促进胆固醇在体内代谢转化成胆汁酸的降血脂机理，证实了汉麻籽多肽的降血脂作用。

实施例7

利用氨基酸自动分析仪测定实施例6获得的组分a、b、c、d四种多肽组分的必需氨基酸组成和非必需氨基酸组成，结果分别如表3和表4所示，

表3

 

表4

 

由表3、表4可知，不同分子量汉麻籽多肽组分中谷氨酸的含量最高，精氨酸含量次之。其中各个多肽组分a、b、c、d中必需氨基酸含量分别为23.83％，24.46％，22.83％，25.19％，其中组分d，即汉麻降血脂肽组合物中的必需氨基酸含量最高，特殊的氨基酸序列使汉麻降血脂肽组合物在人体吸收代谢中表现出显著的血脂调节功效。

实施例8

本实施例通过MALDI-TOF/TOF质谱测试，对实施例6获得的组分d，即汉麻降血脂肽组合物的氨基酸序列进行分析。取1μL样品点至样品靶上，自然干燥后，再取1μLCHCA基质溶液点至对应靶位上并自然干燥，用相同方法在样品靶位相邻靶位上点校准标准品(4700ProteomicsAnalyzerCalibrationMixture1)。采用校准标准品CalibrationMixture1进行外标一级校准，质量误差小于0.5Da；采集图谱条件：一级质谱(MS)范围：800-4000m/z，每张谱图累加500个LaserShots；选择供试品目标多肽对应母离子进行二级质谱测试(MS/MS)，每张谱图累加2500个LaserShots,在上述主要参数固定的前提下，分别调整激光强度和碰撞室(CID)气体气压来获取最佳谱图。

经检测分析，结果表明汉麻降血脂肽组合物中主要包括氨基酸序列为Val-Ser-Glu-Pro-Arg的五肽和氨基酸序列为Ile-Asp-Lys-Phe-Ser-Arg的六肽。

 

摘自国家发明专利，发明人：宋淑敏，魏连会，潘静，董艳，石杰，高媛，赫大新，夏尊民，高宇，申请号201910377762.6，申请日2019.05.05