摘  要：本发明涉及检测技术领域，特别涉及一种工业大麻花叶中二嗪磷、甲基对硫磷、杀螟硫磷、马拉硫磷、倍硫磷、对硫磷六种有机磷农药残留的测定方法。本方法用乙腈和甲苯提取工业大麻花叶中的农药残留，然后用无水硫酸镁和氯化钠振荡促使其分层，使用自制的QuEChERS试剂盒进行提取、净化等过程，气相色谱法（带FPD检测器）测定，外标法定量。本方法操作简单易行，稳定性好，能够准确测定工业大麻花叶中六种有机磷农药残留量。

 

技术要点

1.一种测定工业大麻花叶中六种有机磷农药残留的方法，其特征在于，包括如下步骤：

样品的采集：新鲜工业大麻花叶采集后，60℃下烘干(至水分含量不超过10%)，并过60目筛网，装入密封袋待检；

样品的前处理：准确称取2.0g样品至50mL离心管，加入10mL水，充分振荡直至样品被水浸润完全；静置10min以上，然后加入10mL乙腈，涡旋振荡1min，加入QuEChERS提取试剂包（包含4g无水硫酸镁、1g氯化钠、1g柠檬酸钠，0.5g柠檬酸氢二钠）和5mL甲苯（防止放热，可在冰水中操作），立即涡旋振荡2min，防止无水硫酸镁结块，然后以10000rpm离心5min；移取上层清液4mL于10mL离心管中，加入QuEChERS净化试剂包(包含500mg无水硫酸镁和150mgN-丙基乙二胺键合固相吸附剂（PSA）），然后于涡旋振荡仪上振荡2min，以10000rpm离心2分钟；吸取上清液2mL，经过有机相滤膜过滤，得到提取液，用气相色谱仪分析；

标准工作溶液的配置：配制六种有机磷农药混合标准工作溶液浓度范围为5ng/mL~500ng/mL；

利用GC-FPD对标准工作溶液和样品处理液进行检测，测定方法是以标准工作溶液目标物的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；对制备好的样品处理液进行测定，确认在目标物出峰时间处是否出峰，测得检出目标物的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品中待测组分的浓度，进而计算得其含量；

GC-FPD仪器条件：

①色谱柱为石英弹性毛细管柱HP-5（30m×0.32mm×0.25μm）；

—初始温度60℃，保持5min；

—程序升温1以20℃/min速率由60℃升至210℃；

—程序升温2以1℃/min速率由210℃升至220℃，保持1min；

—程序升温3以30℃/min速度由220℃升至270℃；

—顶温时间在270℃保持5min；

②载气为氮气，恒流模式，流速为0.8mL/min；

③进样口温度200℃，不分流进样，进样量2μL；

④检测器为火焰光度检测器（FPD），温度为250℃。

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述六种有机磷农药包括二嗪磷、甲基对硫磷、杀螟硫磷、马拉硫磷、倍硫磷、对硫磷。

3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述甲苯、乙腈为色谱纯，水为蒸馏水，无水硫酸镁、氯化钠、柠檬酸钠，柠檬酸氢二钠、PSA为优级纯。

4.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述涡旋振荡仪转速大于2500转/分钟。

5.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述过滤所用滤膜为0.45μm的有机系针头滤膜。

6.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述标准对照品工作溶液配置方法为：

混合标准储备液：分别移取二嗪磷、甲基对硫磷、杀螟硫磷、马拉硫磷、倍硫磷、对硫磷(各标准物质浓度均为1mg/mL，共1.2mL)1mL于100mL容量瓶中，用丙酮稀释定容，得到各农药标准品浓度为10μg/mL的混合储备液；

混合标准工作溶液：将混合储备液用丙酮分别稀释为5ng/mL~500ng/mL的混合标准工作溶液。

 

技术领域

本发明涉及检测技术领域，特别涉及一种测定工业大麻花叶中六种有机磷农药残留量的方法。

 

背景技术

有机磷农药，是指含磷元素的有机化合物农药，易分解，在人、畜体内一般不积累，在农药中是极为重要的一类化合物。主要用于防治植物病、虫、草害。在农作物生长过程中为了防治病虫害，大多需要喷洒农药，有机磷农药因品种多、药效高、用途广等原因得到了广泛的使用，在我国农药中占的比重较大，大约占总使用量的70％，导致农作物中可能发生不同程度的有机磷农药残留。且不幸的是有机磷农药不仅仅能对昆虫有杀灭作用，对人体神经、生殖系统等也能产生很大的急性和慢性毒害作用，甚至致癌。QuEChERS(Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe)，是近年来国际上最新发展起来的一种用于农产品检测的快速样品前处理技术，由美国农业部Anastassiades教授等于2003年开发的。前处理是农残检测中耗时最长、工作量最大的部分，前处理质量的好坏决定着分析的准确性和精密度。QuEChERS方法由于具有快速、简单、廉价、有效、可靠、安全的特点成为一种备受关注的样品前处理新技术。

工业大麻(Hemp)的是指THC（四氢大麻酚）含量低于0.3%的大麻，工业大麻中的主要活性成分是大麻素类化合物，包括大麻酚（CBN）、四氢大麻酚（THC）、大麻二酚（CBD）、次大麻二酚（CBDV）等，其主要可用于抗癫痫、抗氧化、抗肿瘤等。时下，工业大麻正成为全球热点，大麻素类物质主要通过工业大麻花叶提取而得，如果在工业大麻生长过程中使用过农药或种植土壤、水体中存在农药残留，则有可能通过生物富集作用富集于工业大麻植株中，进而可能存在工业大麻提取物中，危害人体健康。目前人们对于使用各类产品中可能存在的污染问题越来越重视，且在产品出口贸易过程中农药残留问题也备受重视，因此有必要开发工业大麻花叶中几种有机磷农药残留的检测方法，确定工业大麻花叶中是否存在有机磷农药残留及其含量，但目前未见相关文献报道。

 

发明内容

本方法用乙腈和甲苯提取工业大麻花叶中的有机磷农药残留，然后用无水硫酸镁和氯化钠振荡促使其分层，应用实验室自制的QuEChERS试剂盒进行提取、净化等过程，以气相色谱法（FPD检测器）测定，外标法定量。本方法操作简单易行，稳定性好，能够快速准确测定工业大麻花叶中六种有机磷农药残留残留量。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种测定工业大麻花叶中六种有机磷农药残留的方法，其特征在于，包括如下步骤：

①样品的采集：新鲜工业大麻花叶采集后，60℃下烘干(水分含量不超过10%)，并过60目筛网，装入密封袋待检。

②样品的前处理：准确称取2.0g样品至50mL离心管，加入10mL水，充分振荡直至样

品被水浸润完全。静置10min以上，然后加入10mL乙腈，涡旋振荡1min加入QuEChERS提取试剂包（含有4g无水硫酸镁、1g氯化钠、1g柠檬酸钠，0.5g柠檬酸氢二钠）和5mL甲苯（为防止放热，可在冰水中操作），立即涡旋振荡2min，防止无水硫酸镁结块，然后以10000rpm离心5min。

移取上层清液4mL于10mL离心管中，加入净化试剂包（包含500mg无水硫酸镁和150mgN-丙基乙二胺键合固相吸附剂（PSA）），然后于涡旋振荡仪上振荡2min，以10000rpm离心2分钟。吸取上清液2mL，经过有机相滤膜过滤，得到提取液，以气相色谱仪分析。

③标准工作溶液的配置：配制六种有机磷农药混合标准工作溶液浓度分别约为5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、250ng/mL、500ng/mL。

④利用GC-FPD对标准工作溶液和样品处理液进行检测，测定方法是以标准工作溶液目标物的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；对制备好的样品处理液进行测定，确认在目标物出峰时间处是否出峰，测得检出目标物的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品中待测组分的浓度，进而计算得其含量。

⑤GC-FPD仪器条件：

a.色谱柱为石英弹性毛细管柱HP-5（30m×0.32mm×0.25μm）；

—初始温度60℃，保持5min；

—程序升温1以20℃/min速率由60℃升至210℃；

—程序升温2以1℃/min速率由210℃升至220℃，保持1min；

—程序升温3以30℃/min速度由220℃升至270℃；

—顶温时间在270℃保持5min。

b.载气为氮气，恒流模式，流速为0.8mL/min。

c.进样口温度200℃，不分流进样，进样量2μL。

d.检测器为火焰光度检测器（FPD），温度为250℃。

进一步地，步骤（1）中所述六种有机磷农药包括二嗪磷、甲基对硫磷、杀螟硫磷、马拉硫磷、倍硫磷、对硫磷。

进一步的，步骤（1）中所述甲苯、乙腈为色谱纯，水为蒸馏水，无水硫酸镁、氯化钠、柠檬酸钠，柠檬酸氢二钠、PSA为优级纯。

进一步的，步骤（1）所述涡旋振荡仪转速大于2500转/分钟。

进一步的，步骤（1）中所述过滤所用滤膜为0.45μm的有机系针头滤膜。

进一步地，所述标准对照品工作溶液配置方法为：

①混合储备液：分别移取二嗪磷、甲基对硫磷、杀螟硫磷、马拉硫磷、倍硫磷、对硫磷(各标准物质浓度均为1mg/mL，1.2mL)1mL于100mL容量瓶中，用丙酮稀释定容，得到各农药标准品浓度为10μg/mL的混合储备液。

②混合标准工作溶液：将混合储备液用丙酮分别稀释为5ng/mL~500ng/mL的混合标准工作溶液。避光储存于0-4℃条件下。

本发明的优点：

①本发明建立了一种利用GC-FPD检测工业大麻花叶中六种有机磷农药残留量的方法，为确定工业大麻花叶中是否存在六种有机磷农药残留，以及残留量快速检测提供科学依据。

②本方法使用的QuEChERS前处理方法，操作简单易行，有机溶剂用量少，稳定性好，准确性高，适合六种有机磷农药农药残留的快速检测。

附图说明

图1六种有机磷农药标准对照品图谱。

图2实施例1样品处理液图谱。

 

具体实施方式

以下实施例仅是对本发明予以解释说明，并未对本发明的保护范围进行任何限制。对于本领域技术人员而言，凡未脱离本发明技术精神所作的同等实施方式或变更均在本发明的保护范围之内。

实施例1

工业大麻花叶中六种有机磷农药残留的测定步骤：

（1）样品的采集：新鲜工业大麻花叶采集后，60℃下烘干（水分含量不超过10%），并过60目筛网，装入密封袋待检。

（2）样品的前处理：准确称取2.0g样品至50mL离心管，加入10mL水，充分振荡直至样品被水浸润完全。静置10min以上，然后加入10mL乙腈，涡旋振荡1min加入QuEChERS提取试剂包（含有4g无水硫酸镁、1g氯化钠、1g柠檬酸钠，0.5g柠檬酸氢二钠）和5mL甲苯（为防止放热，可在冰水中操作），立即涡旋振荡2min，防止无水硫酸镁结块，然后以10000rpm离心5min。

移取上层清液4mL于10mL离心管中，加入净化试剂包（包含500mg无水硫酸镁和150mgN-丙基乙二胺键合固相吸附剂（PSA）），然后于涡旋振荡仪上振荡2min，以10000rpm离心2分钟。吸取上清液2mL，经过有机相滤膜过滤，得到提取液，以气相色谱仪分析。

（3）标准工作溶液的配置：配制的混合标准工作溶液浓度分别约为5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、250ng/mL、500ng/mL。

①混合储备液：分别移取二嗪磷、甲基对硫磷、杀螟硫磷、马拉硫磷、倍硫磷、对硫磷(各标准物质浓度均为1mg/mL，1.2mL)各1mL于100mL容量瓶中，用丙酮稀释定容，得到各农药标准品浓度为10μg/mL的混合储备液。

②混合标准工作溶液：将混合储备液用丙酮分别稀释为5ng/mL~500ng/mL的混合标准工作溶液。

（4）利用GC-FPD对标准工作溶液和样品处理液进行检测，测定方法是以标准工作溶液目标物的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；对制备好的样品处理液进行测定，确认在目标物出峰时间处是否出峰，测得检出目标物的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品中待测组分的浓度，进而计算得其含量。

（5）GC-FPD仪器条件：

①色谱柱为石英弹性毛细管柱HP-5（30m×0.32mm×0.25μm）；

初始温度60℃，保持5min；

程序升温1以20℃/min速率由60℃升至210℃；

程序升温2以1℃/min速率由210℃升至220℃，保持1min；—程序升温3以30℃/min速度由220℃升至270℃；

顶温时间在270℃保持5min。

②载气为氮气，恒流模式，流速为0.8mL/min。

③进样口温度200℃，不分流进样，进样量2μL。

④检测器为火焰光度检测器（FPD），温度为250℃。

六种有机磷农药各标准工作溶液的线性方程、相关系数见表1。

表1 六种有机磷农药的线性方程、相关系数

化合物	线性方程	相关系数
二嗪磷	y=13.216x	0.9990
甲基对硫磷	y=8.4117x	0.9997
杀螟硫磷	y=8.8879x	0.9991
马拉硫磷	y=5.9239x	0.9993
倍硫磷	y=9.4782x	0.9985
对硫磷	y=9.7711x	0.9978

 

 

 

 

 

 

 

 

表2 实施例1样品检测结果

备注：N.D表示未检出。

实验例2加标回收及重复性实验

选用空白样品（样品中本身不含目标物），加标后进行方法回收率验证。加标量为0.5mg/kg，添加方法是使用已知浓度的混合标准溶液加入空白试样，平衡24h后，按照实施例1方法进行提取、净化、检测。做6个平行样，得到样品中六种有机磷农药残留的检测结果及回收率和相对标准偏差(RSD)，具体结果见表3，各物质回收率在80%~116%之间，RSD≤5.2%，可见本方法具有较好的回收率和重复性，能够满足检测要求。

表3 加标回收及重复性实验结果

  

图1

 

图2

摘自国家发明专利，发明人：王钲霖，刘胜贵，马海悦，付彬彬，李智高，孔令羽，薛红芬，蒋永昌，申请号202010528164.7，申请日2020.06.11