摘 要：为筛选防治红麻炭疽病的高效杀菌剂，采用生长速率法和凹玻片法室内测定5种杀菌剂对红麻炭疽病菌菌丝生长和孢子萌发的毒力，选择其中3种效果较好的药剂进行田间药效试验。结果表明：咪鲜胺、吡唑醚酯和苯醚甲环唑对红麻炭疽病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制效果较好，菌丝的EC50分别为0.0880、0.1205和0.5136μg·mL-1，孢子萌发的EC50分别为0.1230、0.1658和0.8987μg·mL-1。以25%咪鲜胺乳油900mL·hm-2剂量(用水量为450kg·hm-2)对红麻叶面进行喷施，对红麻炭疽病田间防效达94.34%，且使红麻单株纤维重较对照显著增加15.92%。这一研究可为红麻炭疽病的防治提供参考。
关键词：红麻；炭疽病；杀菌剂；毒力测定；田间防治
红麻(Hibiscus cannabinus)又名洋麻、槿麻，为锦葵科木槿属一年生草本纤维作物，是麻纺和造纸工业的重要原料[1]。因我国耕地资源不足，麻类种植总面积不断下滑，目前约8万hm2，纤维产量约22万t，但麻纺和其他多用途产业需求却持续增加[2]。近年研究[3]发现麻等纤维类作物具生物量大、环境适应性强、经济价值高等优点，且对重金属镉离子有较强的吸收和富集能力。因此，发展红麻产业对造纸工业和土壤镉污染修复具有重要意义。红麻皮可加工成替代塑料的红麻地膜以及在水稻、油菜机插育秧中应用的育秧膜。红麻主要受立枯病(Rhizoctonia solani Kuhn)、炭疽病(Colletorichum hibisci Pol)和根结线虫(Meloidogyne javanica)等病虫危害[4]，其中炭疽病为豫南地区红麻的主要病害之一。信阳地区红麻种植面积约0.8万hm2，炭疽病给当地红麻产业造成巨大经济损失[5]。目前国内对红麻炭疽病化学防治研究较少，仅有少数药剂对炭疽病菌菌丝生长的室内抑制、红麻种子浸种、土壤消毒等报道[6-8]，而对孢子萌发的影响研究至今未见报道。咪鲜胺、吡唑嘧菌酯等药剂对葡萄、南瓜等作物[9-10]炭疽病的防效较好，但用于田间防治红麻炭疽病的效果有待研究。
本研究通过对5种杀菌剂防治红麻炭疽病的室内毒力及田间药效测定，探究其对红麻皮鲜重和纤维产量的影响，并筛选对红麻炭疽病防效较好且可促进其部分农艺性状的药剂，以期为红麻炭疽病的防治提供参考。
1材料与方法
1.1供试菌株
红麻炭疽病病株样本采自信阳市农业科学院陆庙试验基地，由海南省农业科学院植物保护研究所王会芳课题组分离、纯化病原菌，参照文献[11]标准鉴定为黑线炭疽菌(Colletotrichum dematium)，并依据科赫氏法则[12]进行了验证。
1.2供试药剂
25%咪鲜胺乳油(四川润尔科技公司)，250g·L-1嘧菌酯悬浮剂(英国先正达公司)，10%苯醚甲环唑水分散粒剂(英国先正达公司)，70%甲基硫菌灵可湿性粉剂(济南天邦化工公司)，250g·L-1吡唑醚菌酯乳油(浙江新农化工公司)。
1.3药剂对菌丝生长的影响
采用生长速率法[13]，略加改进。以无菌水将每种药剂分别配制成5个梯度浓度，每个浓度吸取5mL加入45mLPDA培养基(无菌水、马铃薯、葡萄糖、琼脂质量比为50∶10∶1∶1)中，每个浓度3次重复，以无菌水为对照(CK)；将已纯化的炭疽病菌菌饼(直径8mm)接入各PDA平板中，置于25℃恒温培养箱中保湿培养。待CK菌丝长满平板后，用十字交叉法测量各平板中菌株直径，计算药剂对菌丝的抑制率、毒力回归方程、EC50、决定系数R2和95%置信限。
1.4药剂对孢子萌发的影响
采用凹玻片法[14]，略加改进。将菌种接入马铃薯葡萄糖液体培养基(无菌水、马铃薯、葡萄糖质量比为50∶10∶1)中，25℃、180r·min-1振荡培养5~7d，期间菌液产孢，将孢子悬浮液浓度调至1×106个·mL-1。以无菌水为溶剂配制药液，每种药剂设5个梯度浓度。将1.5%葡萄糖溶液、药液和菌悬液按体积比1∶1∶1混匀，以无菌水替代药液为对照(CK)，每个浓度3次重复。参照NYT1156.1-2006准则将上述混合菌液滴在双孔凹玻片上，25℃保湿培养，当CK孢子萌发率(萌发标准为孢子芽管长度超过其最大直径的1/2)≥90%时，统计各处理孢子萌发数，计算孢子萌发抑制率、毒力回归方程、EC50、决定系数R2和95%置信限。
1.5药剂对红麻炭疽病的田间药效
1.5.1试验田概况
试验田位于河南信阳市平桥区信阳市农业科学院陆庙试验基地，红麻为多年连作，炭疽病为田间自然发病。红麻品种为杂红992，2023年6月7日露地播种，播种量15.0kg·hm-2，田间水肥正常管理。
1.5.2田间药效试验
7月17日对红麻炭疽病发病情况进行调查，选取室内试验防效较好的3种杀菌剂(咪鲜胺、吡唑醚菌酯和苯醚甲环唑)，依据使用说明选择防治炭疽病推荐的最高和最低用药剂量(表3)，用电动喷雾器(3WBD-20型，台州市泽园玉丰喷雾器厂)对红麻进行叶面喷施。试验采用随机区组设计，每小区面积20m2，设25%咪鲜胺乳油(900、450mL·hm-2)、10%苯醚甲环唑水分散粒剂(300、180mL·hm-2)、250g·L-1吡唑醚菌酯乳油(450、225mL·hm-2)和CK共7个处理(用水量为450kg·hm-2)，每处理4次重复。药后7d调查病害发生情况，并进行第2次施药，7d后再次进行病害调查。每小区随机选择5点取红麻50片叶，参照NYT1464.7-2007准则的分级标准调查发病情况，计算病情指数和防效。
1.6药剂对红麻产量的影响
9月28日收获红麻时，每小区随机选择3点取样，每点选取5株代表性红麻植株，称量每株红麻皮鲜重及鲜皮晒干后纤维重量。
2结果与分析
2.1药剂对菌丝生长的抑制作用
由表1可知，5种药剂对红麻炭疽菌菌丝生长均有一定的抑制作用。抑制作用最好的是咪鲜胺，EC50为0.0880μg·mL-1；其次是吡唑醚菌酯(EC50为0.1205μg·mL-1)和苯醚甲环唑(EC50为0.5136μg·mL-1)；效果最差的是嘧菌酯(EC50为0.8197μg·mL-1)和甲基硫菌灵(EC50为45·0000μg·mL-1)。
表1 5种药剂对菌丝生长的抑制作用
2.2药剂对孢子萌发的抑制作用
由表2可见，5种药剂对红麻炭疽菌孢子萌发均有一定的抑制作用。抑制作用最好的是咪鲜胺，EC50为0.1230μg·mL-1；其次为吡唑醚菌酯和苯醚甲环唑，EC50分别为0.1658、0.8987μg·mL-1；效果最差的是嘧菌酯和甲基硫菌灵，EC50分别为1.1758、72.6724μg·mL-1。5种药效对孢子萌发抑制效果与菌丝基本一致。
表2 5种药剂对孢子萌发的抑制作用
2.3 3种药剂对红麻炭疽病的田间防效
由表3可见，经过2次施药，3种药剂高、低剂量处理后红麻炭疽病病情指数均呈下降趋势，且第2次施药后病情指数低于第1次。各药剂在田间对红麻炭疽病均有一定的防治效果。
第1次施药后7d，咪鲜胺高、低剂量处理对红麻炭疽病田间防效最好(防效分别为86.48%、83.90%)，其次是吡唑醚菌酯高、低剂量处理(分别为78.46%、76.08%)，防效最差的是苯醚甲环唑高、低剂量处理(分别为58.27%、57.54%)，其中咪鲜胺和苯醚甲环唑各处理防效差异显著。
第2次施药后7d，咪鲜胺高、低剂量处理防效(分别为94.34%、92.46%)最好，其次是吡唑醚菌酯高、低剂量处理(分别为83.79%、80.18%)，防效最差是苯醚甲环唑高、低剂量处理(分别为71.66%、70.53%)；其中咪鲜胺、吡唑醚菌酯、苯醚甲环唑各处理间防效差异显著，且同一药剂的高剂量处理防效均好于低剂量处理，但两者差异不显著。
表3 3种药剂对红麻炭疽病的田间防效*
*同列不同小写字母数值间差异显著(P<0.05)。
2.4 3种药剂对红麻产量的影响
由表4可见，施药后单株红麻鲜皮重和纤维重均有提高。就红麻单株鲜皮重而言，与CK相比，咪鲜胺处理增产最多，高、低剂量处理增重分别为16.08%、14.42%，其次为吡唑醚菌酯(分别为8.72%、7.24%)和苯醚甲环唑处理(分别为4.74%、3.50%)。但上述各处理与CK差异均不显著，且每种药剂单株纤维重增加在高、低剂量处理间差异亦不显著。就红麻纤维重而言，咪鲜胺高、低剂量处理较CK增产最多(分别为15.92%、14.50%)，其次为吡唑醚菌酯(分别为7.67%、6.72%)和苯醚甲环唑处理(分别为3.77%、3.42%)。咪鲜胺高、低剂量处理单株纤维重与CK差异显著，但高、低剂量处理间无显著差异。
表4 3种药剂对红麻产量的影响*
*同列不同小写字母数值间差异显著(P<0.05)。
3讨论
咪鲜胺是咪唑类广谱杀菌剂，通过抑制甾醇的生物合成而损坏菌体细胞功能，对姜黄、八角、核桃等炭疽菌均有很好的防效，抑制其菌丝生长的EC50均小于0.1μg·mL-1[14-16]。唐冬兰等[17]研究发现0.3μg·mL-1咪鲜胺对草莓炭疽病分生孢子萌发的抑制率达99.86%。李少卡等[18]用20%苯甲咪鲜胺和50%多菌灵复配，对荔枝炭疽病的田间防效达84.48%。曾向萍等[4]研究发现菌丝的最适生长温度为25℃，最适pH为7，在完全黑暗的环境下菌丝无法生长，在碳源培养基(碳源为淀粉、麦芽糖和甘油)和氮源培养基(氮源为酵母浸膏、牛肉浸膏、蛋白胨、硝酸钾、硝酸钠)上菌丝生长最快。上述结果为炭疽菌生物学研究和病害防治措施探索提供了借鉴。
王会芳等[6]通过测定9种药剂对红麻炭疽菌室内毒力发现，咪鲜胺锰盐的EC50为0.0443μg·mL-1，抑制菌丝效果最好，25%吡唑醚菌酯乳油、10%苯醚甲环唑水分散粒剂、12.5%腈菌唑乳油也表现出较好的菌丝抑制效果，本研究与此结果基本一致。
陈玉森等[7]研究发现红麻种子消毒和土壤灭菌可降低苗期炭疽病的发生。万青山等[8]以50%甲基托布津1250倍液对红麻种子浸种处理，对红麻苗期炭疽病防效可达75.08%，且对种子发芽势、发芽率、出苗率和幼苗长势均未发现不良影响。本研究中咪鲜胺、吡唑醚菌酯和苯醚甲环唑等药剂田间防治红麻炭疽病效果显著，对红麻单株鲜皮重和纤维含量亦未产生不良影响，且显著增加单株纤维含量。红麻是一种天然纤维材料，产量高、价格低廉、生产周期短、环保可再生，可作为塑料填充料、纺织原料、生物质能源、建材纤维板、纸浆、活性碳等[19]，因此，保证红麻植株健康生长尤为重要。综上，本研究结果可为红麻炭疽病的防治及栽培管理提供理论参考。
4结论
室内毒力测定结果显示，5种杀菌剂中咪鲜胺、吡唑醚菌酯和苯醚甲环唑对炭疽菌的菌丝生长、孢子萌发的抑制效果较好。这3种药剂在大田分别以高、低剂量间隔7d进行2次施药处理，结果发现900mL·hm-2浓度的25%咪鲜胺乳油叶面喷施对红麻炭疽病防效最好，且能显著增加红麻单株纤维重。
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