摘 要：本发明属于酶工程技术科学领域，公开一种甘露聚糖酶及其在苎麻脱胶中的应用。本发明采用大肠杆菌表达系统制备具有活性的甘露聚糖酶ManB085，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，通过将甘露聚糖酶ManB085截去301～464位氨基酸残基得到突变型甘露聚糖酶ManB085M，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明的甘露聚糖酶属于嗜热耐碱酶，其最适温度为75℃，最适pH为10，并且能够在pH 7～12范围内保持稳定。在70℃，pH 10热碱条件下，本发明的甘露聚糖酶的半衰期是其对应的野生型甘露聚糖酶的3.9倍，因此其在苎麻脱胶工艺中具有更佳的应用价值，为苎麻脱胶复合酶制剂提供了一种新选择。
权利要求
1.一种甘露聚糖酶，其特征在于，其氨基酸序列SEQ ID NO:2所示。
2.编码权利要求1所述甘露聚糖酶的基因。
3.如权利要求2所述基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列SEQ ID NO:4所示。
4.一种包含如权利要求2所述基因的重组表达载体或重组表达菌株。
5.如权利要求4所述的重组表达载体或重组表达菌株，其特征在于，所述重组表达载体的表达载体包括以pET28a。
6.如权利要求4所述的重组表达载体或重组表达菌株，其特征在于，所述重组表达菌株的宿主细胞包括大肠杆菌BL21(ED3)。
7.如权利要求1所述甘露聚糖酶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：构建权利要求4或5所述重组表达载体并转化至宿主细胞，获得重组表达菌株，对所述重组表达菌株进行培养、诱导表达、分离纯化，得到所述甘露聚糖酶。
8.如权利要求7所述制备方法，其特征在于，所述构建重组表达载体包括如下步骤：
(1)筛选得到氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的甘露聚糖酶，合成对应的核苷酸序列并连接至表达载体，获得重组质粒，所述核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；
(2)以所述重组质粒为模板，设计突变引物，进行PCR扩增获得ManB085M基因和pET-28a(+)骨架，对所述骨架进行DpnI酶切，将酶切后的骨架与ManB085M基因进行同源重组获得所述重组表达载体；
所述突变引物的引物序列序列如下：
ManB085M-F：5’-AGCAAATGGGTCGCGGATCCCAGACCCATAGCGGCTTTTA-3’；
ManB085M-R：5’-TGGTGGTGGTGGTGCTCGAGATGAAAAATGCTGCTCGGAA-3’；
pET-28a(+)-F：5’-CTCGAGCACCACCACCACCACCACTGAGATCCGGCTGCTA-3’；
pET-28a(+)-R：5’-GCGACCCATTTGCTGTCCACCAGTCATGCTAGCCATATGG-3’。
9.如权利要求1至8任一所述甘露聚糖酶在苎麻脱胶中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述甘露聚糖酶用于苎麻脱胶的温度为60～80℃，pH为7～12。
技术领域
本发明涉及酶工程技术科学领域，特别是涉及一种甘露聚糖酶及其在苎麻脱胶中的应用。
背景技术
苎麻纤维的成分被划分为纤维素和非纤维素，苎麻纤维是纺织行业的重要原料，苎麻中的非纤维素成分被称为苎麻中的胶质，苎麻纤维素在原麻中与苎麻中的胶质粘连在一起，胶质残留会直接影响苎麻纤维的品质，如纤维粘结、纤维束分离性较差、手感糙涩，因此苎麻纤维投入纺织前的重要步骤之一就是脱胶，而传统的脱胶需要高温、高压、强酸、强碱等条件，不仅使得纤维遭到损坏，也对环境造成了极大的污染。
苎麻中的非纤维素包括脂蜡质、水溶物、果胶、半纤维素、木质素等，其中半纤维素含量最高。并且苎麻韧皮中的半纤维素主要包括半乳葡甘露聚糖、葡甘露聚糖和木聚糖，占比分别为45.5％、23.2％、8.4％。甘露聚糖酶(EC 3.2.1.78)是分解甘露聚糖的关键酶之一，通过随机切割甘露聚糖主链的β-1，4糖苷键将甘露聚糖分解成葡萄糖、甘露寡糖等低聚糖。甘露聚糖酶与果胶酶、木聚糖酶等联合使用可以去除苎麻中的胶质，对苎麻纤维的损害小，有利于提高苎麻织品的品质，减少废水排放，降低对环境的污染。
纺织工艺流程大都是在高温强碱的环境下进行，因此需要嗜热耐碱的甘露聚糖酶，但目前国内市场售卖甘露聚糖酶多为饲料用甘露聚糖酶，而纺织用甘露聚糖酶种类少且纺织用工业甘露聚糖酶有效pH大多在酸性范围内，例如夏盛工业级甘露聚糖酶的有效温度范围为30～70℃、有效pH为3.0～6.5，满足不了苎麻脱胶高温强碱的环境。嗜热耐碱的甘露聚糖酶因其在极端碱性和高温条件下具有优良的性质和重要的工业应用备受关注。
发明内容
基于此，本发明通过酶挖掘与改造技术获得一种嗜热耐碱的甘露聚糖酶，并将其用于苎麻脱胶工业降解苎麻的甘露聚糖，为苎麻脱胶工业复配酶制剂需求提供一种新选择。
本发明上述目的通过以下技术方案实现：
一种甘露聚糖酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
本发明提供的嗜热耐碱的甘露聚糖酶，其最适温度为75℃，最适pH为10，并且能够在pH 7～12范围内保持稳定。在70℃，pH 10热碱条件下，本发明的甘露聚糖酶的半衰期是其对应的野生型甘露聚糖酶的3.9倍，其在苎麻脱胶工艺中具有更佳的应用价值，为苎麻脱胶复合酶制剂提供了一种新的优良的选择。
进一步，编码所述甘露聚糖酶的基因。
进一步，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。
进一步，包含所述基因的重组载体或重组菌株。
进一步，所述重组载体的表达载体包括以pET28a。
进一步，所述重组菌株的宿主包括大肠杆菌BL21(ED3)。
进一步，所述甘露聚糖酶的制备方法包括如下步骤：构建权利所述重组表达载体并转化至宿主细胞，获得重组表达菌株，对所述重组表达菌株进行培养、诱导表达、分离纯化，得到所述甘露聚糖酶。
进一步，所述构建重组表达载体包括如下步骤：
(1)筛选得到氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的甘露聚糖酶，合成对应的核苷酸序列并连接至表达载体，获得重组质粒，所述核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；
(2)以所述重组质粒为模板，设计突变引物，进行PCR扩增获得ManB085M基因和pET-28a(+)骨架，对所述骨架进行DpnI酶切，将酶切后的骨架与ManB085M基因进行同源重组获得所述重组表达载体；
所述突变引物的引物序列序列如下：
ManB085M-F：5’-AGCAAATGGGTCGCGGATCCCAGACCCATAGCGGCTTTTA-3’；
ManB085M-R：5’-TGGTGGTGGTGGTGCTCGAGATGAAAAATGCTGCTCGGAA-3’；
pET-28a(+)-F：5’-CTCGAGCACCACCACCACCACCACTGAGATCCGGCTGCTA-3’；
pET-28a(+)-R：5’-GCGACCCATTTGCTGTCCACCAGTCATGCTAGCCATATGG-3’。
本发明还提供所述甘露聚糖酶在苎麻脱胶中的应用。
进一步，所述甘露聚糖酶用于苎麻脱胶的温度为60～80℃，pH为7～12。
说明书附图
图1为本发明野生型甘露聚糖酶及突变型甘露聚糖酶的SDS-PAGE蛋白电泳图，其中孔道1是蛋白Marker，孔道2是野生型甘露聚糖酶ManB085，孔道3是突变型甘露聚糖酶ManB085M。
图2为本发明野生型及突变型甘露聚糖酶的最适pH曲线。
图3为本发明野生型及突变型甘露聚糖酶的最适反应温度曲线。
图4为本发明野生型及突变型甘露聚糖酶的pH稳定性曲线。
图5为本发明野生型及突变型甘露聚糖酶在70℃下的半衰期曲线。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好地理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。
为了获得一种新的嗜热耐碱的甘露聚糖酶，使其用于苎麻脱胶工业以降解苎麻中胶质，为苎麻脱胶工业复合酶制剂需求提供一种选择，发明人进行了以下酶挖掘过程：
(1)通过文献检索筛选符合苎麻脱胶环境条件要求的酶，筛选出来源于Bacillussp.N16-5的β-甘露聚糖酶(ManA)，该酶的最适反应温度为70℃，最适pH为9.5，比酶活为5065U/mg。
(2)以β-甘露聚糖酶(ManA)为探针，通过序列同源性在NCBI数据库中进行检索，筛选相似性在40％～80％的氨基酸序列，通过分子进化遗传学分析对上述序列进行系统发育分析并绘制系统进化树。
(3)对探针酶所在分支及其附近分支进行家族结构域划分，在与探针酶同一家族结构域的酶中筛选候选氨基酸序列。
(4)选择距离探针酶最近的氨基酸序列，制备所述氨基酸序列对应的酶并分析其酶学性质，从中筛选能够分解甘露聚糖的嗜热耐碱的酶，获得了氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的野生型甘露聚糖酶(ManB085)，目前还未有将其应用于苎麻脱胶或降解甘露聚糖的研究报道。
其中，所述氨基酸序列对应的酶的制备及其酶学性质分析过程如下：
(1)根据所述氨基酸序列，合成对应的核苷酸序列，将所述核苷酸序列连接至表达载体，获得重组质粒并转化到宿主细胞中，获得重组菌株；
(2)对步骤(1)获得的重组菌株进行种子培养、发酵培养和诱导表达；
(3)离心收集步骤(2)的菌体沉淀，并进行洗涤、超声破碎，离心收集上清液，利用Ni-NTA亲和层析柱获得纯度较高的重组蛋白。
(4)检测步骤(3)获得的重组蛋白分解甘露聚糖酶的酶活、最适pH、最适温度、pH稳定性和半衰期，筛选嗜热耐碱的重组蛋白。
然后，发明人基于半理性设计对上述野生型甘露聚糖酶进行改造，提升该酶的酶学性质使改造后的酶能够在高温强碱的环境下除去苎麻韧皮中的胶质，改造的具体步骤如下：
(1)通过alphafold2对野生型甘露聚糖酶进行结构预测，并在UCLA-DOE LAB网站对预测的结构进行评价，得到可靠的结构模型。
(2)在300K和350K的耦合温度下对野生型甘露聚糖酶进行分子动力学模拟，发现甘露聚糖酶的均方根波动值(RMSF)较高，且波动最大的区域集中在甘露聚糖酶的非催化功能结构(即ManB085的第301～464位氨基酸残基)，RMSF值越高的区域柔性越大，而越高的柔性预示着越低的稳定性。
(3)将野生型甘露聚糖酶RMSF值较高的非催化功能结构截去，仅剩下具有催化功能的结构域并对其重新建模，截短后的蛋白的结构与野生型甘露聚糖酶的功能结构域一致。
(4)在300K和350K的耦合温度下，对截短后的蛋白进行分子动力学模拟，发现其RMSF比野生型甘露聚糖酶平缓，预示着截短后的蛋白可能有更强的刚性，代表着该蛋白的稳定性可能会更高，合成所述截短后的蛋白获得突变型甘露聚糖酶(ManB085M)。
基于上述理论分析，发明人根据探针酶筛选获得了氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的野生型甘露聚糖酶(ManB085)，然后以该野生型甘露聚糖酶为模板，通过分子动力学模拟获得了可能提高该野生型甘露聚糖酶稳定性的突变方式，即截去ManB085的第301～464位氨基酸残基，突变后甘露聚糖酶(ManB085M)的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，其制备方法包括如下步骤：
(1)筛选得到氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的野生型甘露聚糖酶ManB085，合成对应的核苷酸序列并连接至表达载体，获得重组质粒，所述核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；
(2)以步骤(1)获得的重组质粒为模板，设计突变引物ManB085M-F、ManB085M-R、pET-28a(+)-F和pET-28a(+)-R，进行PCR扩增获得ManB085M基因和pET-28a(+)骨架，对所述骨架进行DpnI酶切，将酶切后的骨架与ManB085M基因进行同源重组获得所述重组表达载体；
(3)将步骤(2)获得的重组表达载体转化到宿主细胞中，获得重组表达菌株；
(4)对步骤(3)获得的重组菌株进行种子培养、发酵培养和诱导表达，然后离心收集的菌体沉淀，并进行洗涤、超声破碎，离心收集上清液，利用Ni-NTA亲和层析柱获得纯度较高的重组蛋白，即甘露聚糖酶ManB085M。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。
本发明实施例中的全基因合成皆由苏州金唯智生物科技有限公司完成。
本发明实施例所用试剂如下：
LB种子培养基：5g/L酵母提取物、10g/L胰蛋白胨、10g/L NaCl。
TB发酵培养基：24g/L酵母提取物、12g/L胰蛋白胨，4mL/L甘油、125.4g/L K2HPO4、23.1g/L KH2PO4。
结合缓冲液(Buffer A)：100mM Hepes、50mM NaCl。
洗脱缓冲液(Buffer B)：100mM Hepes、50mM NaCl、300mM咪唑。
本发明实施例中所使用的材料、试剂等，如无特别说明，为从商业途径得到的材料和试剂。实施例中未注明具体条件的实验方法通常按照制造厂商所建议的条件。
实施例1：野生型甘露聚糖酶的制备
(1)重组表达载体pET28a-ManB085的构建
通过NCBI获得嗜热耐碱的野生型甘露聚糖酶ManB085，其氨基酸序列如SEQ IDNo:1所示。将ManB085进行密码子优化后得到如SEQ ID No:3所示的核苷酸序列，全基因合成优化后的核苷酸序列并亚克隆到大肠杆菌基因表达载体pET-28a(+)，得到重组表达载体pET28a-ManB085。
(2)菌落PCR鉴定和测序
将重组表达载体pET28a-ManB085转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，涂布到含硫酸卡那霉素的平板上，37℃培养过夜。对抗性筛选平板上的单菌落进行菌落PCR鉴定确保外源DNA成功整合到表达宿主中。
(3)酶的诱导表达及纯化
挑选阳性单菌落接种到LB种子培养基中，37℃、220rpm震荡培养过夜，得到种子液。将种子液接种到TB发酵培养基中并控制TB发酵培养基起始OD600为0.1，培养1.5h～2h(即OD600达到0.6～0.8)，加入终浓度为0.5mM的诱导剂IPTG，然后将培养基置于16℃，180rpm振荡培养16h。发酵完成后，常温6000rpm离心3min收集菌体，水洗涤后加入Buffer A进行超声破碎，破碎之后4℃、10000rpm离心30min收集上清。
收集到的上清用ATKA蛋白纯化仪进行镍柱亲和层析纯化。利用10％的Buffer B将亲和力较差的杂蛋白除去，用100％的Buffer B将获得的野生型甘露聚糖酶ManB085洗脱，通过SDS-PAGE电泳分析洗脱液中目的蛋白的纯度。
实施例2：突变型甘露聚糖酶的制备
(1)重组表达载体pET28a-ManB085M的构建
以实施例1制得的pET28a-ManB085为模板，设计如表1所示引物，通过PCR扩增ManB085M基因和pET-28a(+)骨架，回收扩增产物得到目的基因片段与pET-28a(+)骨架；PCR扩增的反应体系如表2所示，PCR扩增的反应条件如下：(1)94℃预变性2min；(2)98℃变性10s，55℃退火30s，68℃延伸；共进行30次循环；(3)68℃复性7min，于16℃保温。
表1引入突变的引物及其序列
将pET-28a(+)骨架用DpnI酶切，再使用同源重组酶将经过酶切的骨架与目的基因片段进行同源重组，获得重组表达载体pET28a-ManB085M。所述酶切体系如表3所示，所述同源重组体系为：4μL目的基因、1μL pET-28a(+)骨架和5μL同源重组酶。
表2PCR反应体系
表3酶切体系
(2)菌落PCR鉴定和测序
将重组表达载体pET28a-ManB085M转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，涂布到含硫酸卡那霉素的平板上，37℃培养过夜。对抗性筛选平板上的单菌落进行菌落PCR鉴定确保外源DNA成功整合到表达宿主中。
(3)酶的诱导表达及纯化
挑选阳性单菌落接种到LB种子培养基中，37℃震荡培养过夜，得到种子液。将种子液接种到TB发酵培养基中并控制TB发酵培养基起始OD600为0.1，培养至OD600达到0.6～0.8，加入诱导剂IPTG并于16℃，180rpm振荡培养16h。发酵完成后，常温离心收集菌体，水洗涤后加入Buffer A进行超声破碎，破碎之后4℃离心收集上清。
收集的上清用ATKA蛋白纯化仪进行镍柱亲和层析纯化。利用10％的Buffer B将亲和力较差的杂蛋白除去，再用100％的Buffer B洗脱获得目的蛋白并通过SDS-PAGE电泳分析洗脱液中目的蛋白的纯度，目的蛋白即为突变型甘露聚糖酶ManB085M，其氨基酸序列为SEQ ID NO:2，编码核苷酸序列为SEQ ID NO:4。
效果例1：野生型和突变型甘露聚糖酶的酶学性质测定
(1)酶活力的测定
一个单位的甘露聚糖酶酶活(U)定义为：每分钟水解甘露聚糖底物产生1μmol甘露糖所需要的甘露聚糖酶的量。
采用DNS法测定甘露聚糖酶的酶活，混合40μL适当稀释的酶液和160uL 0.2％底物(pH为10的50mM Gly-NaOH配制的魔芋甘露聚糖溶液)，在70℃反应10min后，加入200μL DNS终止反应，沸水浴5min后将反应液冷却至室温，并于540nm波长下测定其吸光度。空白对照组则加入40μL缓冲液，160μL 0.2％底物，70℃水浴反应10min后，加入200μL DNS终止反应，沸水浴5min后将反应液冷却至室温，于540nm波长下测定其吸光度。
甘露糖标准曲线的制作：用蒸馏水配制浓度为0、0.025mg/mL、0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.3mg/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL的甘露糖标准溶液，分别取400uL不同浓度的甘露糖标准溶液，最后加入400μL DNS溶液，混匀后煮沸5min，将反应液冷却至室温测定其在540nm处的吸光度。
甘露聚糖酶酶活的计算公式如下：酶活(U/mg)＝(W*Df*1000)/(180.16*10*V*C)，其中，C(mg/mL)表示酶的浓度，W(mg)表示酶解产生的甘露糖质量，Df表示稀释倍数，180.16表示甘露糖的分子量，1000表示单位mmol转变为μmol的系数，10(min)表示酶解反应的时间；V(mL)表示反应时加入的酶液体积。
(2)最适pΗ的测定
分别用pH 8～12的缓冲液(Gly-NaOH缓冲液)配制0.2％底物，取160μL底物，加入40μL适当稀释的酶液于70℃反应10min，测定甘露聚糖酶活性。以最适pH下的酶活为100％，计算各pH条件下甘露聚糖酶的相对酶活。
(3)最适温度的测定
在最适pH条件下，将甘露聚糖酶与其底物混合，按步骤(1)所述反应体系测定60℃～85℃范围内反应10min后野生型和突变型甘露聚糖酶的酶活性，以最适温度下的酶活为100％，计算不同温度下甘露聚糖酶的相对酶活。
(4)pH稳定性的测定
分别用pH 7～12的缓冲液配制酶液，并将酶液置于4℃下孵育过夜，按步骤(1)所述反应体系，在最适反应条件下测定甘露聚糖酶活性。以计算得到的最高酶活为100％，计算各pH条件下甘露聚糖酶的相对酶活。
(5)半衰期的测定
将适当稀释的酶液置于70℃的环境中，每隔15min检测其相对酶活，以加热前的酶活为100％，计算甘露聚糖酶孵育不同时间后的相对活性。
参与图2～图3，实施例1所制备的野生型甘露聚糖酶ManB085及突变型甘露聚糖酶ManB085M的最适pH为10，最适温度为75℃。参阅图4，野生型及突变型甘露聚糖酶在最适条件下测得的酶活分别为983U/mg、1176U/mg，且其在pH 7～12的缓冲液中过夜处理后酶活基本没有下降，具有较强的pH稳定性。参阅图5，野生型甘露聚糖酶在70℃下孵育的半衰期为15min，而突变型甘露聚糖酶的半衰期为58min，因此，经过本发明的改造，突变型甘露聚糖酶在野生型甘露聚糖酶的基础上显著提升了酶在碱性条件下的热稳定性。
效果例2：野生型和突变型甘露聚糖酶的苎麻脱胶分析
参考GB 5889—88《苎麻化学成分定量分析方法》对原麻进行成分定量分析，参考GB/T 18147.1—2008《大麻纤维试验方法第1部分：含油率测试方法》计算苎麻含油率后，按照以下方法进行苎麻脱胶：
①将苎麻进行机械碾压直至苎麻柔软松散。
②预处理：将5g苎麻浸渍在含5g/L尿素、3g/L渗透剂JFC-6的溶液中24h，固浴比为1：10。
③用水将麻清洗干净之后，保持苎麻处于湿润状态下进行200次敲打。
④酶处理：固浴比1：10(50mM Gly-NaOH、1g/L JFC-6)，添加800U甘露聚糖酶与商品酶进行复配，在60℃水浴16h进行酶脱胶处理。酶脱胶中使用的商品酶为夏盛纺织用木聚糖酶和诺维信复合精炼酶(主要成分为果胶酶)，添加量分别为800U、3800U。
⑤碱氧处理：将苎麻浸渍在含6mL/L 30％ H2O2，4g/L NaOH溶液中于40℃水浴；将温度升至60℃，保温10min后加入6mL/L 30％H2O2；将温度升至98℃，保温30min；然后使用80～85℃热水洗麻，然后将麻置于2g/L乙酸浸渍10min后水洗；在含2g/L脱氧酶JMN-6的溶液中，50℃浸泡10min，水洗。
⑥上油：在含5g/L乳化油JM-D1、5g/L乳化油JM-D2的溶液中，40℃浸泡45min。
⑦在60℃烘箱中烘干。
将原麻烘至恒重，冷却后称重(记为m0)，经过脱胶处理后将其再次烘干，记录脱胶后苎麻的干重(记为m1)，计算失重率，失重率＝(m0-m1)/m0×100％。
分别参考GB/T 18147.2-2008《大麻纤维试验方法第2部分：残胶率试验方法》、GB/T 5885-1986《苎麻纤维白度试验方法》、GB/T 5882-1986《苎麻束纤维断裂强度试验方法》测定酶法脱胶后的苎麻进行残胶率、蓝光白度、束纤维强度。
参阅表4，在商品酶复配的基础上额外添加甘露聚糖酶处理后，苎麻样品的失重率、残胶率、蓝光白度都有所提升，添加野生型甘露聚糖酶ManB085或突变型甘露聚糖酶ManB085M处理后的苎麻样品的失重率分别上升了1.71％、2.71％，残胶率分别下降了2.59％、2.65％，蓝光白度分别上升了21.34％、9.76％，说明添加甘露聚糖酶有助于苎麻中胶质的去除。
表4不同酶复配处理对苎麻纤维性能的影响
综上，本发明提供的野生型及突变型甘露聚糖酶属于嗜热耐碱酶，其最适温度为75℃，最适pH为10，能够在较宽的pH范围内(即pH 7～12)保持稳定，其中，突变型甘露聚糖酶在热碱条件下的热稳定性在野生型甘露聚糖酶的基础上得以显著提升。因此本发明的野生型及突变型甘露聚糖酶可以用于高温高碱的苎麻脱胶等工艺，且当其与木聚糖酶、果胶裂解酶等商品酶复配时，可以实现降低苎麻残胶率、提升苎麻白度，具有辅助苎麻脱胶的作用。
综上，本发明通过基因挖掘的手段筛选到了嗜热耐碱的甘露聚糖酶，通过将筛选到的甘露聚糖酶进行突变，提高了该酶的热稳定性，增强了该酶在苎麻脱胶工艺中的应用价值。目前国外内售卖的纺织用甘露聚糖酶品种少，因此本发明为苎麻脱胶复合酶制剂提供了性质优良的甘露聚糖酶。
以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。
摘自国家发明专利，发明人：郑穗平 陈愫萍，申请号：CN202311686999.5，申请日：2023.12.08
