摘 要: 本发明属于植物活性蛋白提取领域,具体公开了一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法;包括原料选择?粒径筛分?清洗去杂?微波烘干?脱壳处理?分离?色选?预处理?冷榨除油?超临界萃取除油?酶解去杂?离心?重溶?纯化和冻干等步骤?通过精细的分级筛选和多次纯化过程,最终得到高纯度?特定分子量范围的活性蛋白;在进一步的研究中发现上述的活性蛋白具有提高低浓度布地奈德的抗过敏效果,作为一种活性添加剂,可以提高布地奈德的治疗效果,降低布的奈德含量,降低摄入量,降低布地奈德的副作用。
权利要求书
1.一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)原料选择:选用新鲜?无霉变的带壳亚麻籽;
2)粒径筛分:根据粒径大小对带壳亚麻籽进行分级筛选预处理,以便后续脱壳步骤更均匀和高效;
3)清洗去杂:对筛选后的某一分级的带壳亚麻籽进行清洗;
4)微波烘干;使用分段微波烘干,使得带壳亚麻籽处于适合脱壳状态;
5)脱壳处理:使用脱壳机进行撞击脱壳;
6)分离脱壳亚麻籽:依据脱壳亚麻籽的粒径和亚麻籽壳的粒径的差别,调节筛网筛孔大小,尽量分离得到较纯的脱壳亚麻籽;
7)色选:使用色选机,将脱壳亚麻籽中的杂质和不良品筛除,得到亚麻籽原料;
8)预处理:将亚麻籽原料进行清洗,并干燥;
9)冷榨除油:将预处理之后的亚麻籽原料进行冷榨,分离亚麻籽油和亚麻籽饼;10)超临界萃取除油:对亚麻籽饼进行干燥,并进一步粉碎,过100 200目筛,得到亚麻籽粉,将亚麻籽粉加入超临界萃取装置中使用超临界流体进行萃取其中的油脂成分,得到除油后的亚麻籽粉;
11)酶解去杂:将亚麻籽粉溶于水中,加入纤维素酶?果胶酶和淀粉酶进行酶解,超声酶解,得到酶解液;
12)离心:15000 30000g离心,取得沉淀;
13)重溶:将沉淀干燥后,再次溶解在去离子水中,使用pH调节剂调节pH4.2 5.5之间,20000 30000g离心收集沉淀;
14)纯化:将沉淀重溶,使用分子筛,截取其中分子量50 70kD分子量的蛋白溶液;
15)冻干:将步骤14)得到的特定分子量范围的蛋白溶液浓缩后冻干,得到活性蛋白。
2.根据权利要求1所述的一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法，其特征在于，所述步骤4)微波烘干，包括以下步骤：
第一阶段：控制微波功率，使得温度45 55℃,保持5 10min；
第二阶段：控制微波功率，使得温度55 65℃,保持3 6min；
第三阶段：控制微波功率，使得温度80 90℃，保持2 5min；
第四阶段：循环第一到第三阶段2到3次，完成烘干步骤。
3.根据权利要求1所述的一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法，其特征在于，所述步骤8)预处理中，干燥使得亚麻籽原料的含水率在10 18%之间。
4.根据权利要求1所述的一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法，其特征在于，所述步骤10)超临界萃取除油中，所述干燥使得亚麻籽饼含水率在6 9%之间。
5.根据权利要求1所述的一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法，其特征在于，所述步骤10)超临界萃取除油中，使用超声波萃取装置SFT 110XW，使用二氧化碳为超临界流体，设定萃取温度32 36℃?萃取压力30 40Mpa；完成萃取后，逐渐降低系统内的压力，得到除油后的亚麻籽粉。
6.根据权利要求1所述的一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法，其特征在于，所述11)酶解去杂中，按1g亚麻籽粉溶于10 20mL水中的比例投料，并使得纤维素酶的浓度为100 200U/mL、果胶酶150 250U/mL和淀粉酶200 400U/mL,酶解温度为38 42℃，酶解时同步进行超声，超声功率100W/L，超声频率25 40kHz。
7.根据权利要求1所述的一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法，其特征在于，所述步骤14)纯化中，所述的分子筛的型号为SephadexG 75，上样的粗蛋白浓度为0.1 0.2g/mL，流动相为PBS缓冲液。
8.根据权利要求1所述的一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法，其特征在于，所述步骤15)冻干中，冻干程序如下：a预冻：物料摊铺开进行预冻，摊铺厚度在2 4cm，在常压下进行快速预冻，预冻时间60 80min，预冻温度 35~ 55℃；b冷冻干燥：冻干程序如下：A: 55~ 65℃，压强550 750Pa，冻干45 75min;B: 65~ 75℃，压强120 220Pa,冻干100 140min;C: 75~ 85℃，压强70 120Pa,冻干10 20min；D：恢复到常温常压，干燥至含水量低于5％，得到活性蛋白。
9.一种活性蛋白，其特征在于，由权利要求1 8任一项所述的方法制备得到。
10.如权利要求9所述的活性蛋白在制备抗过敏喷雾中的用途，其特征在于，所述抗过敏喷雾中含有布地奈德和活性蛋白，所述布地奈德浓度为0.32mg/mL,所述活性蛋白浓度为0.1 0.4mg/mL。
技术领域
本发明属于植物活性蛋白提取领域，具体公开了一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法。
背景技术
亚麻籽活性蛋白具有多种用途,这些用途主要基于其丰富的营养成分和独特的生物活性。
1.优质蛋白质来源:亚麻籽活性蛋白是一种优质的植物性蛋白质来源,含有人体所需的全部必需氨基酸,且氨基酸结构优于大豆蛋白。这使得它成为素食者?运动员及需要高蛋白饮食人群的理想选择。
2.提高免疫力:摄入优质的蛋白质能够显著提高人体免疫力,增强身体抵抗力,预防疾病的发生。
3.抗氧化作用:亚麻籽中的木酚素等活性成分具有很强的抗氧化能力,可以清除体内自由基,延缓衰老过程,保护细胞免受氧化损伤。
4.心血管健康:亚麻籽活性蛋白及其所含的木酚素等成分有助于降低胆固醇水平,抑制动脉粥样硬化,从而维护心血管系统的健康。
5.脑功能提升:亚麻籽油中富含的α 亚麻酸是构成大脑细胞膜的重要成分之一,对婴幼儿的智力发育?青少年提高记忆力以及中老年健脑具有重要作用。
6.抗癌作用:研究表明,亚麻籽中的某些成分如木酚素具有抗肿瘤活性,尤其对抗前列腺癌?乳腺癌和结肠癌等有显著效果。
7.调节雌激素水平:木酚素作为一种植物雌激素,可以帮助女性调节体内雌激素的平衡,缓解因激素水平变化引起的不适症状。布地奈德是一种具有抗炎和抗过敏作用的吸入性糖皮质激素类药物,能够治疗过敏性鼻炎,但是使用布地奈德后可能会出现轻度喉部刺激?咳嗽?声音嘶哑等症状。长期使用还可能导致口咽部念珠菌感染,如何降低布地奈德的使用剂量,降低布地奈德的副作用,也是目前的热门研究项目,目前尚无将亚麻籽活性蛋白和布地奈德合用的报道。
发明内容
为了解决上述问题，本发明公开了一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法，使用独特的工艺提取脱壳亚麻籽蛋白中50 70kD的活性蛋白，上述的活性蛋白具有提高低浓度布地奈德的抗过敏效果，作为一种活性添加剂，可以提高布地奈德的治疗效果，降低布的奈德含量，降低摄入量，降低布地奈德的副作用。
本发明的技术方案如下:
一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法,包括以下步骤:
1)原料选择:选用新鲜?无霉变的带壳亚麻籽;
2)粒径筛分:根据粒径大小对带壳亚麻籽进行分级筛选预处理,以便后续脱壳步骤更均匀和高效;
3)清洗去杂:对筛选后的某一分级的带壳亚麻籽进行清洗;
4)微波烘干;使用分段微波烘干,使得带壳亚麻籽处于适合脱壳状态;
5)脱壳处理:使用脱壳机进行撞击脱壳;
6)分离脱壳亚麻籽:依据脱壳亚麻籽的粒径和亚麻籽壳的粒径的差别,调节筛网筛孔大小,尽量分离得到较纯的脱壳亚麻籽;
7)色选:使用色选机,将脱壳亚麻籽中的杂质和不良品筛除,得到亚麻籽原料;
8)预处理:将亚麻籽原料进行清洗,并干燥;
9)冷榨除油:将预处理之后的亚麻籽原料进行冷榨,分离亚麻籽油和亚麻籽饼;
10)超临界萃取除油:对亚麻籽饼进行干燥,并进一步粉碎,过100 200目筛,得到亚麻籽粉,将亚麻籽粉加入超临界萃取装置中使用超临界流体进行萃取其中的油脂成分,得到除油后的亚麻籽粉;
11)酶解去杂:将亚麻籽粉溶于水中,加入纤维素酶?果胶酶和淀粉酶进行酶解,超声酶解,得到酶解液;
12)离心:15000 30000g离心,取得沉淀;
13)重溶:将沉淀干燥后,再次溶解在去离子水中,使用pH调节剂调节pH4.2 5.5之间,20000 30000g离心收集沉淀;
14)纯化:将沉淀重溶,使用分子筛,截取其中分子量50 70kD分子量的蛋白溶液;
15)冻干:将步骤14)得到的特定分子量范围的蛋白溶液浓缩后冻干,得到活性蛋白。
进一步的，上述一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法，所述步骤4)微波烘干，包括以下步骤：
第一阶段：控制微波功率，使得温度45 55℃,保持5 10min;
第二阶段:控制微波功率,使得温度55 65℃,保持3 6min;
第三阶段:控制微波功率,使得温度80 90℃,保持2 5min;
第四阶段：循环第一到第三阶段2到3次，完成烘干步骤。
进一步的，上述一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法，所述步骤8)预处理中，干燥使得亚麻籽原料的含水率在10 18%之间。
进一步的，上述一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法，所述步骤10)超临界萃取除油中，所述干燥使得亚麻籽饼含水率在6 9%之间。
进一步的，上述一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法，所述步骤10)超临界萃取除油中，使用超声波萃取装置SFT 110XW，使用二氧化碳为超临界流体，设定萃取温度32 36℃、萃取压力30 40Mpa；完成萃取后，逐渐降低系统内的压力，得到除油后的亚麻籽粉。
进一步的，上述一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法，所述11)酶解去杂中，按1g亚麻籽粉溶于10 20mL水中的比例投料，并使得纤维素酶的浓度为100 200U/mL?果胶酶150 250U/mL和淀粉酶200 400U/mL,酶解温度为38 42℃,酶解时同步进行超声,超声功率100W/L,超声频率25 40kHz。
进一步的，上述一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法，所述步骤14)纯化中，所述的分子筛的型号为SephadexG 75,上样的粗蛋白浓度为0.1 0.2g/mL，流动相为PBS缓冲液。
进一步的，上述一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法，所述步骤15)冻干中，冻干程序如下：
a预冻：物料摊铺开进行预冻，摊铺厚度在2 4cm,在常压下进行快速预冻,预冻时间60 80min,预冻温度 35~ 55℃；
b冷冻干燥：冻干程序如下：
A: 55~ 65℃,压强550 750Pa,冻干45 75min;
B: 65~ 75℃,压强120 220Pa,冻干100 140min;
C: 75~ 85℃,压强70 120Pa,冻干10 20min；
D:恢复到常温常压,干燥至含水量低于5%,得到活性蛋白。
本发明还公开了一种活性蛋白，由上述的方法制备得到。
本发明还公开了活性蛋白在制备抗过敏喷雾中的用途，所述抗过敏喷雾中含有布地奈德和活性蛋白，所述布地奈德浓度为0.32mg/mL,所述活性蛋白浓度为0.1 0.4mg/mL。
相比现有技术，本发明具有如下有益效果：
1.原料选择与预处理优化：通过选用新鲜、无霉变的带壳亚麻籽，并进行粒径筛分和清洗去杂，确保了原料的优质性和后续处理的均匀性。
2.微波烘干技术：采用分段微波烘干方法，有效控制了温度和时间，使得带壳亚麻籽达到适合脱壳的状态，提高了脱壳效率和成品质量。
3.高效脱壳与分离：使用脱壳机进行撞击脱壳，并通过调节筛网筛孔大小实现较纯的脱壳亚麻籽分离，减少了杂质对最终产品的影响。
4.色选与深度清洁：利用色选机进一步去除杂质和不良品，再通过预处理中的清洗和干燥步骤，确保亚麻籽原料的洁净度和适宜的含水率，为后续提取过程打下良好基础。
5.综合除油技术：结合冷榨和超临界萃取两种方法，有效去除了亚麻籽中的油脂成分，特别是超临界萃取技术的应用，能够在较低温度下高效提取油脂，保护了活性蛋白的生物活性和稳定性。
6.酶解去杂与纯化：通过多酶协同作用进行酶解处理，有效去除了亚麻籽粉中的纤维素、果胶和淀粉等杂质，再通过分子筛纯化得到特定分子量范围的活性蛋白溶液，提高了产品的纯度。
7.冻干工艺优化：采用优化的冻干程序，确保了活性蛋白在低温低压下快速干燥至含水量低于5％，既保留了蛋白的生物活性又延长了其保质期。
8.高价值应用潜力：制备得到的活性蛋白具有多种潜在应用价值，特别是在抗过敏喷雾中的应用，通过与布地奈德等药物的联合使用，能够发挥更好的治疗效果，为相关药物的开发提供了新的思路和方法。
附图说明
图1为本发明的工艺流程图；
图1
图2为对比例1和实施例1 3的亚麻籽脱壳率的比较；
亚麻籽脱壳率(%)
图2
图3为最终获得的活性蛋白的量(g)的比较；
活性蛋白质量(g)
图3
图4为过敏性鼻炎改善得分情况。
过敏性鼻炎改善得分
图4
具体实施方式
如图1所示，一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法，包括以下步骤：
1)原料选择:选用新鲜?无霉变的带壳亚麻籽;
2)粒径筛分:根据粒径大小对带壳亚麻籽进行分级筛选预处理,以便后续脱壳步骤更均匀和高效;
3)清洗去杂:对筛选后的某一分级的带壳亚麻籽进行清洗;
4)微波烘干;使用分段微波烘干,使得带壳亚麻籽处于适合脱壳状态;
5)脱壳处理:使用脱壳机进行撞击脱壳;
6)分离脱壳亚麻籽:依据脱壳亚麻籽的粒径和亚麻籽壳的粒径的差别,调节筛网筛孔大小,尽量分离得到较纯的脱壳亚麻籽;
7)色选:使用色选机,将脱壳亚麻籽中的杂质和不良品筛除,得到亚麻籽原料;
8)预处理:将亚麻籽原料进行清洗,并干燥;
9)冷榨除油:将预处理之后的亚麻籽原料进行冷榨,分离亚麻籽油和亚麻籽饼;
10)超临界萃取除油:对亚麻籽饼进行干燥,并进一步粉碎,过100 200目筛,得到亚麻籽粉,将亚麻籽粉加入超临界萃取装置中使用超临界流体进行萃取其中的油脂成分,得到除油后的亚麻籽粉;
11)酶解去杂:将亚麻籽粉溶于水中,加入纤维素酶?果胶酶和淀粉酶进行酶解,超声酶解,得到酶解液;
12)离心:15000 30000g离心,取得沉淀;
13)重溶:将沉淀干燥后,再次溶解在去离子水中,使用pH调节剂调节pH4.2 5.5之间,20000 30000g离心收集沉淀;
14)纯化:将沉淀重溶,使用分子筛,截取其中分子量50 70kD分子量的蛋白溶液;
15)冻干:将步骤14)得到的特定分子量范围的蛋白溶液浓缩后冻干,得到活性蛋白?
所述步骤4)微波烘干，包括以下步骤：
第一阶段:控制微波功率,使得温度45 55℃,保持5 10min;
第二阶段:控制微波功率,使得温度55 65℃,保持3 6min;
第三阶段:控制微波功率,使得温度80 90℃,保持2 5min;
第四阶段:循环第一到第三阶段2到3次,完成烘干步骤。
所述步骤8)预处理中，干燥使得亚麻籽原料的含水率在10 18%之间；
所述步骤10)超临界萃取除油中，所述干燥使得亚麻籽饼含水率在6 9%之间；
所述步骤10)超临界萃取除油中，使用超声波萃取装置SFT 110XW，使用二氧化碳为超临界流体，设定萃取温度32 36℃?萃取压力30 40Mpa；完成萃取后，逐渐降低系统内的压力，得到除油后的亚麻籽粉；
所述11)酶解去杂中，按1g亚麻籽粉溶于10 20mL水中的比例投料，并使得纤维素酶的浓度为100 200U/mL?果胶酶150 250U/mL和淀粉酶200 400U/mL,酶解温度为38 42℃，酶解时同步进行超声，超声功率100W/L,超声频率25 40kHz；
所述步骤14)纯化中，所述的分子筛的型号为SephadexG 75，上样的粗蛋白浓度为0.1 0.2g/mL,流动相为PBS缓冲液；
所述步骤15)冻干中，冻干程序如下：
a预冻：物料摊铺开进行预冻，摊铺厚度在2 4cm,在常压下进行快速预冻,预冻时间60 80min,预冻温度 35~ 55℃；
b冷冻干燥：冻干程序如下：
A: 55~ 65℃,压强550 750Pa,冻干45 75min；
B: 65~ 75℃,压强120 220Pa,冻干100 140min；
C: 75~ 85℃,压强70 120Pa,冻干10 20min；
D：恢复到常温常压，干燥至含水量低于5％，得到活性蛋白。
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法，包括以下步骤：
1)原料选择:选用新鲜、无霉变的带壳亚麻籽；
2)粒径筛分:根据粒径大小对带壳亚麻籽进行分级筛选预处理，以便后续脱壳步骤更均匀和高效；
3)清洗去杂:对筛选后的某一分级的带壳亚麻籽进行清洗；
4)微波烘干;使用分段微波烘干，使得带壳亚麻籽处于适合脱壳状态；
5)脱壳处理:使用脱壳机进行撞击脱壳；
6)分离脱壳亚麻籽:依据脱壳亚麻籽的粒径和亚麻籽壳的粒径的差别，调节筛网筛孔大小，尽量分离得到较纯的脱壳亚麻籽；
7)色选:使用色选机，将脱壳亚麻籽中的杂质和不良品筛除，得到亚麻籽原料；
8)预处理:将亚麻籽原料进行清洗，并干燥；
9)冷榨除油:将预处理之后的亚麻籽原料进行冷榨，分离亚麻籽油和亚麻籽饼；
10)超临界萃取除油：对亚麻籽饼进行干燥，并进一步粉碎，过100 200目筛，得到亚麻籽粉，将亚麻籽粉加入超临界萃取装置中使用超临界流体进行萃取其中的油脂成分，得到除油后的亚麻籽粉；
11)酶解去杂:将亚麻籽粉溶于水中，加入纤维素酶、果胶酶和淀粉酶进行酶解，超声酶解，得到酶解液；
12)离心:15000g离心，取得沉淀；
13)重溶:将沉淀干燥后，再次溶解在去离子水中，使用pH调节剂调节pH4.2,20000g离心收集沉淀；
14)纯化:将沉淀重溶，使用分子筛，截取其中分子量50 70kD分子量的蛋白溶液；
15)冻干:将步骤14)得到的特定分子量范围的蛋白溶液浓缩后冻干，得到活性蛋白。
所述步骤4)微波烘干,包括以下步骤:
第一阶段:控制微波功率,使得温度45 55℃,保持5min;
第二阶段:控制微波功率,使得温度55 65℃,保持3min;
第三阶段:控制微波功率,使得温度80 90℃,保持2min;
第四阶段:循环第一到第三阶段2次,完成烘干步骤?
所述步骤8)预处理中,干燥使得亚麻籽原料的含水率在10 18%之间;
所述步骤10)超临界萃取除油中,所述干燥使得亚麻籽饼含水率在6 9%之间;
所述步骤10)超临界萃取除油中,使用超声波萃取装置SFT 110XW,使用二氧化碳为超临界流体,设定萃取温度32℃?萃取压力30Mpa;完成萃取后,逐渐降低系统内的压力,得到除油后的亚麻籽粉;
所述11)酶解去杂中,按1g亚麻籽粉溶于10mL水中的比例投料,并使得纤维素酶的浓度为100U/mL?果胶酶150U/mL和淀粉酶200U/mL,酶解温度为38℃,酶解时同步进行超声,超声功率100W/L,超声频率25kHz;
所述步骤14)纯化中,所述的分子筛的型号为SephadexG 75,上样的粗蛋白浓度为0.1g/mL,流动相为PBS缓冲液;
所述步骤15)冻干中,冻干程序如下:
a预冻:物料摊铺开进行预冻,摊铺厚度在2cm,在常压下进行快速预冻,预冻时间60min,预冻温度 35~ 55℃;
b冷冻干燥:冻干程序如下:
A: 55~ 65℃,压强550 750Pa,冻干45min;
B: 65~ 75℃,压强120 220Pa,冻干100min;
C: 75~ 85℃,压强70 120Pa,冻干10min;
D:恢复到常温常压,干燥至含水量低于5%,得到活性蛋白。
实施例2
一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法,包括以下步骤:
1)原料选择:选用新鲜?无霉变的带壳亚麻籽;
2)粒径筛分:根据粒径大小对带壳亚麻籽进行分级筛选预处理,以便后续脱壳步骤更均匀和高效;
3)清洗去杂:对筛选后的某一分级的带壳亚麻籽进行清洗;
4)微波烘干;使用分段微波烘干,使得带壳亚麻籽处于适合脱壳状态;
5)脱壳处理:使用脱壳机进行撞击脱壳;
6)分离脱壳亚麻籽:依据脱壳亚麻籽的粒径和亚麻籽壳的粒径的差别,调节筛网筛孔大小,尽量分离得到较纯的脱壳亚麻籽;
7)色选:使用色选机,将脱壳亚麻籽中的杂质和不良品筛除,得到亚麻籽原料;
8)预处理:将亚麻籽原料进行清洗,并干燥;
9)冷榨除油:将预处理之后的亚麻籽原料进行冷榨,分离亚麻籽油和亚麻籽饼;
10)超临界萃取除油:对亚麻籽饼进行干燥,并进一步粉碎,过100 200目筛,得到亚麻籽粉,将亚麻籽粉加入超临界萃取装置中使用超临界流体进行萃取其中的油脂成分,得到除油后的亚麻籽粉;
11)酶解去杂:将亚麻籽粉溶于水中,加入纤维素酶?果胶酶和淀粉酶进行酶解,超声酶解,得到酶解液;
12)离心:25000g离心,取得沉淀;
13)重溶:将沉淀干燥后,再次溶解在去离子水中,使用pH调节剂调节pH4.8,25000g离心收集沉淀;
14)纯化:将沉淀重溶,使用分子筛,截取其中分子量50 70kD分子量的蛋白溶液;
15)冻干:将步骤14)得到的特定分子量范围的蛋白溶液浓缩后冻干,得到活性蛋白。
所述步骤4)微波烘干,包括以下步骤:
第一阶段:控制微波功率,使得温度45 55℃,保持8min;
第二阶段:控制微波功率,使得温度55 65℃,保持4min;
第三阶段:控制微波功率,使得温度80 90℃,保持3min;
第四阶段:循环第一到第三阶段2次,完成烘干步骤?
所述步骤8)预处理中,干燥使得亚麻籽原料的含水率在10 18%之间;
所述步骤10)超临界萃取除油中,所述干燥使得亚麻籽饼含水率在6 9%之间;
所述步骤10)超临界萃取除油中,使用超声波萃取装置SFT 110XW,使用二氧化碳为超临界流体,设定萃取温度34℃?萃取压力35Mpa;完成萃取后,逐渐降低系统内的压力,得到除油后的亚麻籽粉;
所述11)酶解去杂中,按1g亚麻籽粉溶于15mL水中的比例投料,并使得纤维素酶的浓度为150U/mL?果胶酶200U/mL和淀粉酶300U/mL,酶解温度为40℃,酶解时同步进行超声,超声功率100W/L,超声频率30kHz;
所述步骤14)纯化中,所述的分子筛的型号为SephadexG 75,上样的粗蛋白浓度为0.15g/mL,流动相为PBS缓冲液;
所述步骤15)冻干中,冻干程序如下:
a预冻:物料摊铺开进行预冻,摊铺厚度在3cm,在常压下进行快速预冻,预冻时间70min,预冻温度 35~ 55℃;
b冷冻干燥:冻干程序如下:
A: 55~ 65℃,压强550 750Pa,冻干60min;
B: 65~ 75℃,压强120 220Pa,冻干120min;
C: 75~ 85℃,压强70 120Pa,冻干15min;
D:恢复到常温常压,干燥至含水量低于5%,得到活性蛋白。
实施例3
一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)原料选择:选用新鲜?无霉变的带壳亚麻籽;
2)粒径筛分:根据粒径大小对带壳亚麻籽进行分级筛选预处理,以便后续脱壳步骤更均匀和高效;
3)清洗去杂:对筛选后的某一分级的带壳亚麻籽进行清洗;
4)微波烘干;使用分段微波烘干,使得带壳亚麻籽处于适合脱壳状态;
5)脱壳处理:使用脱壳机进行撞击脱壳;
6)分离脱壳亚麻籽:依据脱壳亚麻籽的粒径和亚麻籽壳的粒径的差别,调节筛网筛孔大小,尽量分离得到较纯的脱壳亚麻籽;
7)色选:使用色选机,将脱壳亚麻籽中的杂质和不良品筛除,得到亚麻籽原料;
8)预处理:将亚麻籽原料进行清洗,并干燥;
9)冷榨除油:将预处理之后的亚麻籽原料进行冷榨,分离亚麻籽油和亚麻籽饼;
10)超临界萃取除油:对亚麻籽饼进行干燥,并进一步粉碎,过100 200目筛,得到亚麻籽粉,将亚麻籽粉加入超临界萃取装置中使用超临界流体进行萃取其中的油脂成分,得到除油后的亚麻籽粉;
11)酶解去杂:将亚麻籽粉溶于水中,加入纤维素酶?果胶酶和淀粉酶进行酶解,超声酶解,得到酶解液;
12)离心:30000g离心,取得沉淀;
13)重溶:将沉淀干燥后,再次溶解在去离子水中,使用pH调节剂调节pH5.5,30000g离心收集沉淀;
14)纯化:将沉淀重溶,使用分子筛,截取其中分子量50 70kD分子量的蛋白溶液;
15)冻干:将步骤14)得到的特定分子量范围的蛋白溶液浓缩后冻干,得到活性蛋白。
所述步骤4)微波烘干,包括以下步骤:
第一阶段:控制微波功率,使得温度45 55℃,保持10min;
第二阶段:控制微波功率,使得温度55 65℃,保持6min;
第三阶段:控制微波功率,使得温度80 90℃,保持5min;
第四阶段:循环第一到第三阶段2次,完成烘干步骤。
所述步骤8)预处理中,干燥使得亚麻籽原料的含水率在10 18%之间;
所述步骤10)超临界萃取除油中,所述干燥使得亚麻籽饼含水率在6 9%之间;
所述步骤10)超临界萃取除油中,使用超声波萃取装置SFT 110XW,使用二氧化碳为超临界流体,设定萃取温度36℃?萃取压力40Mpa;完成萃取后,逐渐降低系统内的压力,得到除油后的亚麻籽粉;
所述11)酶解去杂中,按1g亚麻籽粉溶于20mL水中的比例投料,并使得纤维素酶的浓度为200U/mL?果胶酶250U/mL和淀粉酶400U/mL,酶解温度为42℃,酶解时同步进行超声,超声功率100W/L,超声频率40kHz;
所述步骤14)纯化中,所述的分子筛的型号为SephadexG 75,上样的粗蛋白浓度为0.2g/mL,流动相为PBS缓冲液;
所述步骤15)冻干中,冻干程序如下:
a预冻:物料摊铺开进行预冻,摊铺厚度在2 4cm,在常压下进行快速预冻,预冻时间80min,预冻温度 35~ 55℃;
b冷冻干燥:冻干程序如下:
A: 55~ 65℃,压强550 750Pa,冻干75min;
B: 65~ 75℃,压强120 220Pa,冻干140min;
C: 75~ 85℃,压强70 120Pa,冻干20min;
D:恢复到常温常压,干燥至含水量低于5%,得到活性蛋白。
对比例1
所述步骤4)微波烘干,包括以下步骤:
控制微波功率,使得温度55 65℃,保持60min;
其余同实施例2。
对比例2
不包括10)超临界萃取除油,其余同实施例2。
对比例3
不包括11)酶解去杂,其余同实施例2
测试例1
比较对比例1和实施例1 3的步骤(5)之后的亚麻籽脱壳率。
所述脱壳率是指经过脱壳处理后,成功从亚麻籽中分离出的外壳部分占原始亚麻籽总质量的百分比,即脱壳率=(壳的质量/原始亚麻籽的总质量)×100%。
结果见表1和图2。
表1 亚麻籽脱壳率(%)
从表1数据可知,使用分段式的微波干燥处理,可以大幅增加亚麻籽的脱壳率,为后续的活性蛋白的提取提高效率。
测试例2
比较实施例1 3以及对比例1 2最终获得的活性蛋白的量,起始的带壳亚麻籽质量均为100g。
结果如表2和图3所示。
表2 最终获得的活性蛋白的量(g)
从表2结果来看,本发明所述的方法对上述活性蛋白的提取均较好,加入10)超临界萃取除油和11)酶解去杂可进一步提高活性蛋白的得率。
测试例3
将实施例2得到的活性蛋白,加入不同浓度布地奈德鼻喷雾剂中,进行测试,配方表见表3
表3 配方表
依据上述表3的配方,对患有过敏性鼻炎的志愿者进行治疗,随机分成7组,每组30人,每天喷5喷,每喷约20微升,连续7天,填写7天之后你鼻炎的缓解情况,5分为很满意,4分为满意,3分为有改善,2分为略有改善,1分为没有改善,0分为更严重,取平均值。结果见表4和图4所示。
表4 过敏性鼻炎改善得分表
从以上配方1 7的结果来看,在布地奈德0.32mg/mL以上,加入0.1或者0.4mg/mL活性蛋白,均能较大幅度提高其治疗效果,特别是当布地奈德0.32mg/mL加入0.1mg/mL活性蛋白是,其治疗效果与单独使用市面上常见的1.28mg/mL布地奈德相当。
从以上测试结果可以看出,上述的活性蛋白具有提高低浓度布地奈德的抗过敏效果,作为一种活性添加剂,可以提高布地奈德的治疗效果,降低布的奈德含量,降低摄入量,理论上可以降低布地奈德的副作用。
以上为本发明的有限的几种优选实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。
文章摘自国家发明专利,一种从脱壳亚麻籽中提取活性蛋白的方法,陈建国,赵晓萍,韦雪,任亮亮,孟云,董馨,史敏,陈宇航,申请号,202411084311.0,申请日,2024.08.08。
